Öýjük göni RT qPCR toplumy - SYBR REaşyl I göni öýjükli liz öýjügi Bir ädimli qRT-PCR toplumlary
Düşündirişler
Bu toplum, RT-qPCR reaksiýalary üçin medeniýetli öýjük nusgalaryndan RNK-ny çalt çykaryp bilýän, şeýle hem köp wagt talap edýän we agyr RNK arassalamak prosesini ýok edip biljek özboluşly liz bufer ulgamyny ulanýar.RNK şablony bary-ýogy 7 minutda alyp bolýar.5×Göni RT Mix we 2×Kit bilen üpjün edilen göni qPCR Mix-SYBR reagentleri hakyky mukdarda PCR netijelerini çalt we netijeli alyp biler.
5×Göni RT Mix we 2×Göni qPCR Mix-SYBR güýçli inhibitor çydamlylygyna eýe we nusgalaryň lizaty gönüden-göni RT-qPCR üçin şablon hökmünde ulanylyp bilner.Bu toplumda özboluşly RNK ýokary ýakynlygy bolan Foregene ters transkriptazasy we Hot D-Taq DNK polimeraza, dNTP, MgCl bar2, reaksiýa buferi, PCR optimizator we stabilizator.
Aýratynlyklary
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit komponentleri
| I bölüm | Bufer CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Bufer ST | |
| II bölüm | DNK öçüriji |
| 5 × Göni RT garyndysy | |
| 2 × Göni qPCR Mix-SYBR | |
| 50 × ROX salgylanma boýagy | |
| RNase-ddH2O | |
| Görkezmeler | |
Aýratynlyklary we artykmaçlyklary
■Pleönekeý we täsirli: “Cell Direct RT” tehnologiýasy bilen RNK nusgalaryny bary-ýogy 7 minutda alyp bolýar.
10 Mysal üçin isleg az, sebäbi 10 öýjük synagdan geçirilip bilner.
■ passokary geçirijilik: 384, 96, 24, 12, 6 guýy tarelkalarda ösdürilip ýetişdirilen öýjüklerde RNK-ny çalt tapyp bilýär.
■ DNK Eraser goýberilen genomlary çalt aýyryp, soňraky synag netijelerine täsirini ep-esli azaldyp biler.
RT Optimallaşdyrylan RT we qPCR ulgamy, iki basgançakly RT-PCR ters transkripsiýasyny has täsirli we PCR has anyk we RT-qPCR reaksiýa ingibitorlaryna has çydamly edýär.
Kit toplumy
Ulanyş gerimi: medeniýetli öýjükler.
- Mysal lizisi bilen çykarylan RNK: diňe bu toplumyň RT-qPCR şablony üçin ulanylýar.
- Kitap aşakdaky maksatlar üçin ulanylyp bilner: gen aňlatmagyň derňewi, siRNA-töwekgelçilikli gen dymdyrmak täsirini barlamak, neşe barlagy we ş.m.
Diagramma
Saklamak we ýaramlylyk möhleti
Bu toplumyň I bölümi 4 at derejesinde saklanmalydyr;II bölüm -20 at derejesinde saklanmalydyr.
Foregene Protease Plus II 4-de saklanmalydyr℃, -20 at-da doňmaň.
Reagent 2×Göni qPCR Mix-SYBR -20-de saklanmalydyr℃garaňkyda;ýygy-ýygydan ulanylsa, 4-de hem saklanyp bilnerShort gysga möhletli saklamak üçin (10 günüň içinde ulanyň).
Real Time PCR başlangyç dizaýn ýörelgeleri
Öňe ugrukdyryjy we ters primer
Real Time PCR üçin deslapky dizaýn gaty möhümdir.Primerler PCR güýçlendirmegiň aýratynlygy we netijeliligi bilen baglanyşykly we aşakdaky ýörelgelere salgylanyp düzülip bilner:
Esasy uzynlygy: 18-30bp.
GC mazmuny: 40-60%.
Tm bahasy: Primer 5 ýaly başlangyç dizaýn programma üpjünçiligi, primeriň Tm bahasyny berip biler.Stokarky we aşaky akymlaryň Tm bahalary mümkin boldugyça ýakyn bolmaly.Tm hasaplaýyş formulasy hem ulanylyp bilner: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).PCR ýerine ýetirilende, Tm bahasyndan 5 ° C-den pes temperatura, adatça, gyzdyryjy temperatura hökmünde saýlanýar (anneal temperaturanyň degişli ýokarlanmagy PCR reaksiýasynyň aýratynlygyny artdyryp biler).
Primerler we PCR önümleri:
Dizaýn başlangyç PCR güýçlendiriji önümiň uzynlygy, has gowusy 100-150bp.
Şablonyň ikinji derejeli gurluş meýdanyndaky dizaýn desgalary mümkin boldugyça gaça durmalydyr.
Stokarky we aşaky akymlaryň 3 ′ ujunyň arasynda 2 ýa-da has köp goşmaça esaslaryň döremeginden gaça duruň.
Primer 3 ′ terminal bazasy yzygiderli 3 goşmaça G ýa-da C bilen bolup bilmez.
Astarlaryň özleri goşmaça gurluşlara eýe bolup bilmezler, ýogsam PCR güýçlendirilmegine täsir edip, saç düzümi emele geler.
ATCG başlangyç yzygiderlilikde mümkin boldugyça deň paýlanmaly we 3 ′ terminal bazasy T. ýaly gaça durmaly.
Goşundy 1 ： Öýjük göni RT-qPCR Kit komponent goşundy paketi
1.Öýjük liziniň çözgüdi
|
| |||
| Kit komponentleri (24 guýy liz ulgamy / guýy) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T. | 500 T. | ||
| BölümMen | Bufer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Bufer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| BölümII | DNK öçüriji | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT garyndysy
|
| |
| Kit komponentleri (20 μl reaksiýa ulgamy) | DRT-01011-B1 |
| 200 T. | |
| 5 × Göni RT garyndysy | 800 μl |
| RNase-ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Kit komponentleri (20 μl reaksiýa ulgamy) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T. | 1000 T. | |
| 2 × Göni qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50 × ROX salgylanma boýagy | 40 μl | 200 μl |
| RNase-ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Gollanma gollanmalary:
