(96 guýy) “QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit” - SYBR Green I.
Düşündirişler
The(96 guýy) QuickEasyTM Öýjük göni RT-qPCR toplumy-SYBR Green I.üpjün edýärözboluşly liz bufer ulgamyto RNK-ny çalt goýberiňmedeniýetli öýjükdenRT-qPCR reaksiýalary üçin nusgalar, köp wagt talap edýän we köp zähmet çekýärRNK arassalamak prosesi we zerur RNK şablonyny almak üçin bary-ýogy 7 minut gerek.The5 × Göni RT garyndysywe2 × Göni qPCR Mix-SYBRgutuda berlenler çalt wereal wagt mukdaryny netijeli almakPCR netijeleri.
5 × Göni RT Mix we 2 × Göni qPCR Mix-SYBR güýçli inhibitor çydamlylygyna eýedir we netijeli ters transkripsiýa we ýörite güýçlendirmek üçin şablon hökmünde synag ediljek nusganyň lizatyny ulanyp biler.Reagentde RNK-a ýakynlygy bolan Foregene üýtgeşik ters transkriptaz, şeýle hem Hot D-Taq DNA polimeraza, dNTP, MgCl bar2 , reaksiýa buferi, PCR optimizator we stabilizator we nusgany çalt, aňsat we takyk kesgitlemek üçin liz buferi bilen bilelikde ulanylyp bilner we ýokary duýgurlyk, güýçli aýratynlyk we gowy durnuklylyk aýratynlyklaryna eýedir.
Kitap 96 oňat medeniýetli öýjükleriň mikro-ulgam lizisine gönükdirilendir we oňat birmeňzeşligi we yzygiderliligi bar;toplum komponentleri 96 liz reaksiýasyny, 96 ters transkripsiýa reaksiýasyny we 96 × 2 qPCR reaksiýasyny üpjün edýär, bu reagentleriň yzygiderli açylmagy, doňmagy we eremegi we reagent öndürijiliginiň zaýalanmagynyň öňüni alyp, 96 guýy öýjük plastinkasyny bir gezeklik ulanyp bilýär.
Kit komponentleri
| Kitiň düzümi ( 50 μL liz ulgamy / 20 μLRT reaksiýa ulgamy / 20μL qPCR reaksiýa ulgamy) | DRT-03011 | Bellik | |
| 96T | |||
| BölümI | BuferCL | 5 ml | ÖýjükLizis |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| BuferST | 500 μL | ||
| Bölüm II | DNKÖçüriji | 100 μL | |
| 5 × Göni RT garyndysy | 400 μL | RT | |
| 2 × Göni qPCR garyndysy-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50 × ROX salgylanma boýagy | 400µL | ||
| RNase- MugtddH2 O | 1.7mL |
| |
| Manual | 1 bölek | 1 hyzmat | |
*: Liz reagenti DNK Eraser toplumyň II bölümine girýär;Öýjük lizisi, RT we qPCR komponentlerini aýratyn satyn alyp bolýar.
Aýratynlyklary we artykmaçlyklary
■Pleönekeý we täsirli: “Cell Direct RT” tehnologiýasy bilen RNK nusgalaryny bary-ýogy 7 minutda alyp bolýar.
10 Mysal üçin isleg az, sebäbi 10 öýjük synagdan geçirilip bilner.
■ passokary geçirijilik: 384, 96, 24, 12, 6 guýy tarelkalarda ösdürilip ýetişdirilen öýjüklerde RNK-ny çalt tapyp bilýär.
■ DNK Eraser goýberilen genomlary çalt aýyryp, soňraky synag netijelerine täsirini ep-esli azaldyp biler.
RT Optimallaşdyrylan RT we qPCR ulgamy, iki basgançakly RT-PCR ters transkripsiýasyny has täsirli we PCR has anyk we RT-qPCR reaksiýa ingibitorlaryna has çydamly edýär.
Kit toplumy
Ulanyş gerimi: medeniýetli öýjükler.
- Mysal lizisi bilen çykarylan RNK: diňe bu toplumyň RT-qPCR şablony üçin ulanylýar.
- Kitap aşakdaky maksatlar üçin ulanylyp bilner: gen aňlatmagyň derňewi, siRNA-töwekgelçilikli gen dymdyrmak täsirini barlamak, neşe barlagy we ş.m.
Saklamak we ýaramlylyk möhleti
Bu toplumyň I bölümi 4-de saklanmalydyr℃;II bölüm -20 at derejesinde saklanmalydyr.
Foregene Protease Plus II 4-de saklanmalydyr℃, -20 at-da doňmaň.
Reagent 2×Göni qPCR Mix-Taqman -20-de saklanmalydyr℃garaňkyda;ýygy-ýygydan ulanylsa, 4-de hem saklanyp bilnerShort gysga möhletli saklamak üçin (10 günüň içinde ulanyň).
Real Time PCR başlangyç dizaýn ýörelgeleri
Öňe ugrukdyryjy we ters primer
Real Time PCR üçin deslapky dizaýn gaty möhümdir.Primerler PCR güýçlendirmegiň aýratynlygy we netijeliligi bilen baglanyşykly we aşakdaky ýörelgelere salgylanyp düzülip bilner:
- Esasy uzynlygy: 18-30bp.
- GC mazmuny: 40-60%.
- Tm bahasy: Primer 5 ýaly başlangyç dizaýn programma üpjünçiligi, primeriň Tm bahasyny berip biler.Stokarky we aşaky akymlaryň Tm bahalary mümkin boldugyça ýakyn bolmaly.Tm hasaplaýyş formulasy hem ulanylyp bilner: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).PCR ýerine ýetirilende, Tm bahasyndan 5 ° C-den pes temperatura, adatça, gyzdyryjy temperatura hökmünde saýlanýar (anneal temperaturanyň degişli ýokarlanmagy PCR reaksiýasynyň aýratynlygyny artdyryp biler).
- Primerler we PCR önümleri:
- Dizaýn başlangyç PCR güýçlendiriji önümiň uzynlygy, has gowusy 100-150bp.
- Şablonyň ikinji derejeli gurluş meýdanyndaky dizaýn desgalary mümkin boldugyça gaça durmalydyr.
- Stokarky we aşaky akymlaryň 3 ′ ujunyň arasynda 2 ýa-da has köp goşmaça esaslaryň döremeginden gaça duruň.
- Primer 3 ′ terminal bazasy yzygiderli 3 goşmaça G ýa-da C bilen bolup bilmez.
- Astarlaryň özleri goşmaça gurluşlara eýe bolup bilmezler, ýogsam PCR güýçlendirilmegine täsir edip, saç düzümi emele geler.
- ATCG başlangyç yzygiderlilikde mümkin boldugyça deň paýlanmaly we 3 ′ terminal bazasy T. ýaly gaça durmaly.
Goşundy1 ： C.ell göniRT-qPCR Kit komponent goşmaça paket
1. “Lizis” çözgüdi
| Öýjük liziniň çözgüdi | |||
| Kit komponentleri (24 guýy liz ulgamy / guýy) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T. | 500 T. | ||
| BölümMen | Bufer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Bufer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| BölümII | DNK öçüriji | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Kit komponentleri (20 μl reaksiýa ulgamy) | DRT-01011-B1 |
| 200 T. | |
| 5 × Göni RT garyndysy | 800 μl |
| RNase-ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR garyşyk | ||
| Kit komponentleri (20 μl reaksiýa ulgamy) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T. | 1000 T. | |
| 2 × Göni qPCR Mix-Takman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × ROX salgylanma boýagy | 40 μl | 200 μl |
| RNase-ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Gollanma gollanmalary:
