Real wagt PCR Easyᵀᴹ-Takman
Kitiň beýany
2X hakyky PCR aňsatTM“Real Time PCR Easy” tarapyndan üpjün edilen “Mix-Taqman”TM-Taqman toplumy, önümiň aýratynlygyny we reaksiýa duýgurlygyny ep-esli ýokarlandyryp biljek Real Time PCR güýçlendirme reaksiýalary üçin belli floresan zondlary ulanýan täze premiks ulgamy.ROX içerki gözegçilik boýagy hökmünde üpjün edilýär.
2X hakyky PCR aňsatTMMix-Taqman, Foregene-iň özboluşly gyzgyn başlangyç Taq DNK polimerazyny öz içine alýar.Adaty Taq fermentleri bilen deňeşdirilende, ýokary güýçlendirme netijeliliginiň, güýçli güýçlendirme ukybynyň we pes gabat gelme derejesiniň artykmaçlyklary bar.Aýratyn däl güýçlendirmäni azaldyp, PCR-iň takyklygyny ýokarlandyryp biler.
Aýratynlyklary
Hakyky wagt PCR aňsatTM-Takman | ||||
Kitiň düzümi (20μl ulgam) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
200T | 500T | 1000T | 2000T | |
2 ×Hakyky PCRAňsatTMGaryş-Takman | 1 ml ×2 | 1.7 ml ×3 | 1.7 ml ×6 | 1.7 ml ×12 |
20×ROX salgylanma boýagy | 200 μl | 0,5ml | 1 ml | 1 ml × 2 |
DNase-ddH2O | 1,7 ml | 1.7 ml ×2 | 10 ml | 20 ml |
Igörkezme | 1 | 1 | 1 | 1 |
Aýratynlyklary we artykmaçlyklary
■ pleönekeý - tejribe ýalňyşlygyny we iş wagtyny azaltmak üçin 2X PCR Mix
■ ificörite - optimallaşdyrylan bufer we gyzgyn başlangyç Taq fermenti, güýçlendirilmedik we başlangyç ölçeg emele gelmeginiň öňüni alyp biler
■ sensokary duýgurlyk - şablonyň pes nusgalaryny tapyp biler
■ Gowy köpugurlylyk - köp mukdarda PCR gurallaryna laýyk gelýär
Kit toplumy
qPCR derňewi
Iş akymy
Grafiki
Saklamak we saklamak möhleti
Bu toplum ýagtylykdan uzakda saklanmalydyr we -20 at derejesinde saklanmalydyr.Frequygy-ýygydan ulanylsa, gysga wagtyň dowamynda (10 gün) 4 at-da saklanyp bilner.
Güýçlendirme signallary ýok
1. Toplumdaky Taq DNK polimeraza, toplumyň nädogry saklanmagy ýa-da möhletiniň gutarmagy sebäpli işjeňligini ýitirýär.
Teklip: toplumyň saklanyş şertlerini tassyklaň;PCR ulgamyna degişli mukdarda Taq DNA polimerazyny goşuň ýa-da degişli synaglar üçin täze Real Time PCR Kit satyn alyň.
2. DNK şablonynda Taq DNA polimerazynyň inhibitorlary köp.
Teklip: Şablony takyklaň ýa-da ulanylýan şablonyň mukdaryny azaldyň.
3.Mg2 + konsentrasiýasy laýyk däl.
Teklip: Biziň hödürleýän 2 × Real PCR Mix-iň Mg2 + konsentrasiýasy 3,5mM.Şeýle-de bolsa, käbir ýörite desgalar we galyplar üçin Mg2 + konsentrasiýasy has ýokary bolup biler.Şonuň üçin Mg2 + konsentrasiýasyny optimizirlemek üçin göni MgCl2 goşup bilersiňiz.Optimizasiýa üçin her gezek Mg2 + 0.5mM köpeltmek maslahat berilýär.
4. PCR güýçlendirmek şertleri amatly däl, başlangyç yzygiderliligi ýa-da konsentrasiýasy nädogry.
Teklip: primer yzygiderliliginiň dogrudygyny tassyklaň we primer peselmedi;güýçlendiriji signal gowy däl bolsa, gyzdyryjy temperaturany peseltmäge we deslapky konsentrasiýany laýyk sazlamaga synanyşyň.
5. Şablonyň mukdary gaty az ýa-da gaty köp.
Teklip: Şablonyň çyzykly gradient dilýusiýasyny ýerine ýetiriň we Real Time PCR eksperimenti üçin iň gowy PCR täsiri bilen şablonyň konsentrasiýasyny saýlaň.
NTC aşa ýokary floresan bahasyna eýe
1. Iş wagtynda ýüze çykýan reagent hapalanma.
Teklip: Real Time PCR synaglary üçin täze reagentler bilen çalyşyň.
2. Hapalanma PCR reaksiýa ulgamy taýýarlanylanda ýüze çykdy.
Teklip: Iş wagtynda zerur gorag çäreleri görüň, meselem: lateks ellik geýmek, süzgüçli turbanyň ujuny ulanmak we ş.m.
3. Astarlar peselýär we desgalaryň zaýalanmagy belli bir güýçlenmä sebäp bolar.
Teklip: Astarlaryň zaýalanandygyny ýa-da ýokdugyny anyklamak üçin SDS-PAGE elektroforezini ulanyň we Real Time PCR synaglary üçin täze primerler bilen çalşyň.
Esasy ölçeg ýa-da ýörite däl güýçlendirme
1.Mg2 + konsentrasiýasy laýyk däl.
Teklip: 2 × Real PCR EasyTM Mix-iň Mg2 + konsentrasiýasy 3,5 m.Şeýle-de bolsa, käbir ýörite desgalar we galyplar üçin Mg2 + konsentrasiýasy has ýokary bolup biler.Şonuň üçin Mg2 + konsentrasiýasyny optimizirlemek üçin göni MgCl2 goşup bilersiňiz.Optimizasiýa üçin her gezek Mg2 + 0.5mM köpeltmek maslahat berilýär.
2. PCR annealing temperaturasy gaty pes.
Teklip: PCR annealing temperaturasyny her gezek 1 ℃ ýa-da 2 Inc ýokarlandyryň.
3. PCR önümi gaty uzyn.
Teklip: Real Time PCR önüminiň uzynlygy 500bp-den köp bolmaly däl, 100-150bp aralygynda bolmaly.
4. Astarlar peselýär we desgalaryň zaýalanmagy belli bir güýçlendirişiň ýüze çykmagyna sebäp bolar.
Teklip: Astarlaryň zaýalanandygyny ýa-da ýokdugyny anyklamak üçin SDS-PAGE elektroforezini ulanyň we Real Time PCR synaglary üçin täze primerler bilen çalşyň.
5. PCR ulgamy nädogry ýa-da ulgam gaty kiçi.
Teklip: PCR reaksiýa ulgamy gaty az, kesgitlemegiň takyklygynyň peselmegine sebäp bolar.Real Time PCR synagyny täzeden işletmek üçin mukdar PCR guraly tarapyndan maslahat berilýän reaksiýa ulgamyny ulanmak iň gowusydyr.
San bahalarynyň pes gaýtalanmagy
1. Gural näsaz işleýär.
Teklip: Guralyň her PCR deşiginiň arasynda ýalňyşlyklar bolup biler, netijede temperaturany dolandyrmak ýa-da kesgitlemek wagtynda pes köpelmek bolýar.Degişli guralyň görkezmelerine laýyklykda barlaň.
2.Saýlaw arassalygy gowy däl.
Teklip: Haram nusgalar şablonyň we desgalaryň arassalygyny öz içine alýan synagyň pes öndürijiligine getirer.Şablony täzeden düzmek iň gowusy, desgalar SDS-PAGE bilen iň gowy arassalanýar.
3. PCR ulgamyny taýýarlamak we saklamak wagty gaty uzyn.
Teklip: Taýýarlanylandan soň derrew PCR synagy üçin Real Time PCR ulgamyny ulanyň we ony uzak saklamaň.
4. PCR güýçlendirmek şertleri amatly däl, başlangyç yzygiderliligi ýa-da konsentrasiýasy nädogry.
Teklip: primer yzygiderliliginiň dogrudygyny tassyklaň we primer peselmedi;güýçlendiriji signal gowy däl bolsa, gyzdyryjy temperaturany peseltmäge we deslapky konsentrasiýany laýyk sazlamaga synanyşyň.
5. PCR ulgamy nädogry ýa-da ulgam gaty kiçi.
Teklip: PCR reaksiýa ulgamy gaty az, kesgitlemegiň takyklygynyň peselmegine sebäp bolar.Real Time PCR synagyny täzeden işletmek üçin mukdar PCR guraly tarapyndan maslahat berilýän reaksiýa ulgamyny ulanmak iň gowusydyr.