Öýjük göni RT qPCR toplumy - Taqman göni öýjük lizis öýjügi Bir basgançakly qRT-PCR Kits Probe
Düşündirişler
Bu önüm, RT-qPCR reaksiýalary üçin medeniýetli öýjük nusgalaryndan RNK-ny çalt çykarmak, köp wagt talap edýän we köp işleýän RNK arassalaýyş amalyny ýok etmek üçin zerur bolan RNA şablonyny almak üçin bary-ýogy 7 minut, toplum bilen üpjün edilen 5 × Direct RT Mix, 2 × Göni qPCR Mix-Taqman real wagt mukdarda PCR netijelerini alyp biler.
5 × Göni RT Mix we 2 × Göni qPCR Mix-Taqman güýçli inhibitor çydamlylygyna eýedir we şablon hökmünde ölçeljek nusganyň lizatyny ulanyp, netijeli tersine we ýörite güýçlendirme ýerine ýetirip biler.Reagentde Foregene ters transkriptaz, Hot D-Taq DNK polimeraza, dNTP, MgCl bar2, Nusgalary çalt we aňsat kesgitlemek üçin liz buferi bilen ulanyp boljak we ýokary duýgurlyk, aýratynlyk we durnuklylyk aýratynlyklaryna eýe bolan Reaksiýa buferi, PCR Optimizer we Stabilizer.
Aýratynlyklary
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit komponentleri
| QuickEasyTMÖýjük göni RT-qPCR Kit-Takman | ||||
| Kit komponentleri 20μl qPCR reaksiýa ulgamy | DRT-01021 | DRT-01022 | Bellik | |
| 200 T. | 1000 T. | |||
|
Bölüm I | Bufer CL | 4 ml | 20 ml | Öýjük lizisi |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Bufer ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Bölüm II | DNK öçüriji | 80 μl | 400 μl | |
| 5 × Göni RT garyndysy * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2 × Göni qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20 × ROX salgylanma boýagy | 40 μl | 200 μl | ||
| RNase-ddH2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Gollanma gollanmasy | 1 bölek | 1 bölek | ||
*:Öýjük lizisi, 5 × Göni RT Mix, 2 × Göni qPCR Mix-Taqman aýratyn satyn alyp bolýar
Aýratynlyklary we artykmaçlyklary
■Pleönekeý we täsirli: “Cell Direct RT” tehnologiýasy bilen RNK nusgalaryny bary-ýogy 7 minutda alyp bolýar.
10 Mysal üçin isleg az, sebäbi 10 öýjük synagdan geçirilip bilner.
■ passokary geçirijilik: 384, 96, 24, 12, 6 guýy tarelkalarda ösdürilip ýetişdirilen öýjüklerde RNK-ny çalt tapyp bilýär.
■ DNK Eraser goýberilen genomlary çalt aýyryp, soňraky synag netijelerine täsirini ep-esli azaldyp biler.
RT Optimallaşdyrylan RT we qPCR ulgamy, iki basgançakly RT-PCR ters transkripsiýasyny has täsirli we PCR has anyk we RT-qPCR reaksiýa ingibitorlaryna has çydamly edýär.
Kit toplumy
Ulanyş gerimi: medeniýetli öýjükler.
- Mysal lizisi bilen çykarylan RNK: diňe bu toplumyň RT-qPCR şablony üçin ulanylýar.
- Kitap aşakdaky maksatlar üçin ulanylyp bilner: gen aňlatmagyň derňewi, siRNA-töwekgelçilikli gen dymdyrmak täsirini barlamak, neşe barlagy we ş.m.
Saklamak we ýaramlylyk möhleti
Bu toplumyň I bölümi 4-de saklanmalydyr℃;II bölüm -20 at derejesinde saklanmalydyr.
Foregene Protease Plus II 4-de saklanmalydyr℃, -20 at-da doňmaň.
Reagent 2×Göni qPCR Mix-Taqman -20-de saklanmalydyr℃garaňkyda;ýygy-ýygydan ulanylsa, 4-de hem saklanyp bilnerShort gysga möhletli saklamak üçin (10 günüň içinde ulanyň).
Real Time PCR başlangyç dizaýn ýörelgeleri
Öňe ugrukdyryjy we ters primer
Real Time PCR üçin deslapky dizaýn gaty möhümdir.Primerler PCR güýçlendirmegiň aýratynlygy we netijeliligi bilen baglanyşykly we aşakdaky ýörelgelere salgylanyp düzülip bilner:
- Esasy uzynlygy: 18-30bp.
- GC mazmuny: 40-60%.
- Tm bahasy: Primer 5 ýaly başlangyç dizaýn programma üpjünçiligi, primeriň Tm bahasyny berip biler.Stokarky we aşaky akymlaryň Tm bahalary mümkin boldugyça ýakyn bolmaly.Tm hasaplaýyş formulasy hem ulanylyp bilner: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).PCR ýerine ýetirilende, Tm bahasyndan 5 ° C-den pes temperatura, adatça, gyzdyryjy temperatura hökmünde saýlanýar (anneal temperaturanyň degişli ýokarlanmagy PCR reaksiýasynyň aýratynlygyny artdyryp biler).
- Primerler we PCR önümleri:
- Dizaýn başlangyç PCR güýçlendiriji önümiň uzynlygy, has gowusy 100-150bp.
- Şablonyň ikinji derejeli gurluş meýdanyndaky dizaýn desgalary mümkin boldugyça gaça durmalydyr.
- Stokarky we aşaky akymlaryň 3 ′ ujunyň arasynda 2 ýa-da has köp goşmaça esaslaryň döremeginden gaça duruň.
- Primer 3 ′ terminal bazasy yzygiderli 3 goşmaça G ýa-da C bilen bolup bilmez.
- Astarlaryň özleri goşmaça gurluşlara eýe bolup bilmezler, ýogsam PCR güýçlendirilmegine täsir edip, saç düzümi emele geler.
- ATCG başlangyç yzygiderlilikde mümkin boldugyça deň paýlanmaly we 3 ′ terminal bazasy T. ýaly gaça durmaly.
Goşundy1 ： C.ell göniRT-qPCR Kit komponent goşmaça paket
1. “Lizis” çözgüdi
| Öýjük liziniň çözgüdi | |||
| Kit komponentleri (24 guýy liz ulgamy / guýy) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T. | 500 T. | ||
| BölümMen | Bufer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Bufer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| BölümII | DNK öçüriji | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Kit komponentleri (20 μl reaksiýa ulgamy) | DRT-01011-B1 |
| 200 T. | |
| 5 × Göni RT garyndysy | 800 μl |
| RNase-ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR garyşyk | ||
| Kit komponentleri (20 μl reaksiýa ulgamy) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T. | 1000 T. | |
| 2 × Göni qPCR Mix-Takman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × ROX salgylanma boýagy | 40 μl | 200 μl |
| RNase-ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Gollanma gollanmalary:
