Foreasy HS Taq DNK polimeraza
Kitiň beýany:
◮Specificokary aýratynlyk: hotokary gyzgyn işjeňlikli ferment.
◮Çalt güýçlendirme: 10 sek / kb.
◮Tempokary şablonyň uýgunlaşmagy: Highokary güýçlendirmek üçin ulanylyp bilnerGCbahasywegüýçlendirmek üçin dürli kyn DNK şablony.
◮Güýçli wepalylyk: wepalylyk 6 gezekof adaty tak fermenti.
Düşündiriş
Foreasy HS Taq DNK polimeraza, gen rekombinasiýa tehnologiýasy arkaly Escherichia coli in engineeringener bakteriýalarynda ýüze çykarylan täze Taq fermentidir.Ferment aýratyn bir amal bilen bejerilenden soň's işjeňligi ýylylyk işjeňleşdirilmezinden ozal saklanýar we şeýlelik bilen pes temperatura şertlerinde primerleriň ýa-da primer ölçegleriniň ýörite däl garylmagy netijesinde dörän aýratyn güýçlendirmäni saklaýar.Bu önüm ýokary derejeli PCR React üçin amatlyion, M ultiple x PCR, ýokary GC mazmuny (> 60%),bilenikinji derejeli gurluşýa-da başgagüýçli fon genomyicsgüýçlendirmek we uly göwrümli genomicsgüýçlendirmek.Fermentde 5 '→ 3' DNK polimeraza işjeňligi we 5 '→ 3' ekzonukleý işjeňligi bar, ýöne 3 '→ 5' ekzonukleý işjeňligi ýok.
Kit komponentleri
| Komponent | IM-01021 | IM-01022 | IM-01023 |
| Foreasy HS Taq DNK polimeraza (5 U / μL) | 5000 U (1 ml) | 50 KU (10 ml) | 500 KU (100 ml) |
| 2 × Taq reaksiýa buferi | 25mL × 5 | 250 ml × 5 | 500 ml × 25 |
Aýratynlyklary we artykmaçlyklary
- specificokary aýratynlyk: hotokary gyzgyn işjeňlikli ferment.
- Çalt güýçlendirmek: 10 sek / kb.
- tempokary şablonyň uýgunlaşmagy: Highokary güýçlendirmek üçin ulanylyp bilnerGCbahasywegüýçlendirmek üçin dürli kyn DNK şablony.
- Güýçli wepalylyk: wepalylyk 6 gezekof adaty tak fermenti.
Kit toplumy
- Dürli PCR / qPCR ulgamy we göni PCR ulgamy
- PCR güýçlendirilen DNK bölegi
- DNK belligi
- DNK yzygiderliligi
- PCR goşmaça guýruk
Iş kesgitlemesi
1U: 10 nmol goşmak üçin zerur ferment mukdaryDNKkislota-eräp bilmeýän maddalara işjeňleşdirilen losos sperm DNK-ny şablon / primer, 74 ° C, 30 minut.
Reaksiýanyň ýagdaýy
| Temperatura | Reaksiýa wagty | Sikl wagty |
| 37 ° C. | 5 min | 1 |
| 94 ° C. | 5 min | 1 |
| 94 ° C. | 10 sek | 40 |
| 60 ° C. | 10 sek |
Bellik:10 µL we 20 µL ulgamlary üçin, termiki tigirçiniň ýylylyk gapagy ýok bolsa, deň mukdarda mineral ýag goşuň.
PCR reaksiýa şertleri şablonlaryň, desgalaryň we şuňa meňzeşleriň gurluş şertlerine baglylykda üýtgeýär.Specificörite amalda, şablonyň görnüşi, nyşan bölekleriniň ululygy, güýçlendirilen bölekleriň esasy yzygiderliligi, GC mazmuny we primeriň uzynlygy ýaly aýratyn şertlere görä, iň ýokary reaksiýa şertlerini dizaýn etmeli.
Saklamak
2 ýyl üçin -20 ± 5 ° C ýa-da uzak möhletli saklamak üçin -80 ° C.
Güýçlendirme signallary ýok
1. Toplumdaky Taq DNK polimeraza, toplumyň nädogry saklanmagy ýa-da möhletiniň gutarmagy sebäpli işjeňligini ýitirýär.
Teklip: toplumyň saklanyş şertlerini tassyklaň;PCR ulgamyna degişli mukdarda Taq DNA polimerazyny goşuň ýa-da degişli synaglar üçin täze Real Time PCR Kit satyn alyň.
2. DNK şablonynda Taq DNA polimerazynyň inhibitorlary köp.
Teklip: Şablony takyklaň ýa-da ulanylýan şablonyň mukdaryny azaldyň.
3.Mg2 + konsentrasiýasy laýyk däl.
Teklip: Biziň hödürleýän 2 × Real PCR Mix-iň Mg2 + konsentrasiýasy 3,5mM.Şeýle-de bolsa, käbir ýörite desgalar we galyplar üçin Mg2 + konsentrasiýasy has ýokary bolup biler.Şonuň üçin Mg2 + konsentrasiýasyny optimizirlemek üçin göni MgCl2 goşup bilersiňiz.Optimizasiýa üçin her gezek Mg2 + 0.5mM köpeltmek maslahat berilýär.
4. PCR güýçlendirmek şertleri amatly däl, başlangyç yzygiderliligi ýa-da konsentrasiýasy nädogry.
Teklip: primer yzygiderliliginiň dogrudygyny tassyklaň we primer peselmedi;güýçlendiriji signal gowy däl bolsa, gyzdyryjy temperaturany peseltmäge we deslapky konsentrasiýany laýyk sazlamaga synanyşyň.
5. Şablonyň mukdary gaty az ýa-da gaty köp.
Teklip: Şablonyň çyzykly gradient dilýusiýasyny ýerine ýetiriň we Real Time PCR eksperimenti üçin iň gowy PCR täsiri bilen şablonyň konsentrasiýasyny saýlaň.
NTC aşa ýokary floresan bahasyna eýe
1. Iş wagtynda ýüze çykýan reagent hapalanma.
Teklip: Real Time PCR synaglary üçin täze reagentler bilen çalyşyň.
2. Hapalanma PCR reaksiýa ulgamy taýýarlanylanda ýüze çykdy.
Teklip: Iş wagtynda zerur gorag çäreleri görüň, meselem: lateks ellik geýmek, süzgüçli turbanyň ujuny ulanmak we ş.m.
3. Astarlar peselýär we desgalaryň zaýalanmagy belli bir güýçlenmä sebäp bolar.
Teklip: Astarlaryň zaýalanandygyny ýa-da ýokdugyny anyklamak üçin SDS-PAGE elektroforezini ulanyň we Real Time PCR synaglary üçin täze primerler bilen çalşyň.
Esasy ölçeg ýa-da ýörite däl güýçlendirme
1.Mg2 + konsentrasiýasy laýyk däl.
Teklip: 2 × Real PCR EasyTM Mix-iň Mg2 + konsentrasiýasy 3,5 m.Şeýle-de bolsa, käbir ýörite desgalar we galyplar üçin Mg2 + konsentrasiýasy has ýokary bolup biler.Şonuň üçin Mg2 + konsentrasiýasyny optimizirlemek üçin göni MgCl2 goşup bilersiňiz.Optimizasiýa üçin her gezek Mg2 + 0.5mM köpeltmek maslahat berilýär.
2. PCR annealing temperaturasy gaty pes.
Teklip: PCR annealing temperaturasyny her gezek 1 ℃ ýa-da 2 Inc ýokarlandyryň.
3. PCR önümi gaty uzyn.
Teklip: Real Time PCR önüminiň uzynlygy 500bp-den köp bolmaly däl, 100-150bp aralygynda bolmaly.
4. Astarlar peselýär we desgalaryň zaýalanmagy belli bir güýçlendirişiň ýüze çykmagyna sebäp bolar.
Teklip: Astarlaryň zaýalanandygyny ýa-da ýokdugyny anyklamak üçin SDS-PAGE elektroforezini ulanyň we Real Time PCR synaglary üçin täze primerler bilen çalşyň.
5. PCR ulgamy nädogry ýa-da ulgam gaty kiçi.
Teklip: PCR reaksiýa ulgamy gaty az, kesgitlemegiň takyklygynyň peselmegine sebäp bolar.Real Time PCR synagyny täzeden işletmek üçin mukdar PCR guraly tarapyndan maslahat berilýän reaksiýa ulgamyny ulanmak iň gowusydyr.
San bahalarynyň pes gaýtalanmagy
1. Gural näsaz işleýär.
Teklip: Guralyň her PCR deşiginiň arasynda ýalňyşlyklar bolup biler, netijede temperaturany dolandyrmak ýa-da kesgitlemek wagtynda pes köpelmek bolýar.Degişli guralyň görkezmelerine laýyklykda barlaň.
2.Saýlaw arassalygy gowy däl.
Teklip: Haram nusgalar şablonyň we desgalaryň arassalygyny öz içine alýan synagyň pes öndürijiligine getirer.Şablony täzeden düzmek iň gowusy, desgalar SDS-PAGE bilen iň gowy arassalanýar.
3. PCR ulgamyny taýýarlamak we saklamak wagty gaty uzyn.
Teklip: Taýýarlanylandan soň derrew PCR synagy üçin Real Time PCR ulgamyny ulanyň we ony uzak saklamaň.
4. PCR güýçlendirmek şertleri amatly däl, başlangyç yzygiderliligi ýa-da konsentrasiýasy nädogry.
Teklip: primer yzygiderliliginiň dogrudygyny tassyklaň we primer peselmedi;güýçlendiriji signal gowy däl bolsa, gyzdyryjy temperaturany peseltmäge we deslapky konsentrasiýany laýyk sazlamaga synanyşyň.
5. PCR ulgamy nädogry ýa-da ulgam gaty kiçi.
Teklip: PCR reaksiýa ulgamy gaty az, kesgitlemegiň takyklygynyň peselmegine sebäp bolar.Real Time PCR synagyny täzeden işletmek üçin mukdar PCR guraly tarapyndan maslahat berilýän reaksiýa ulgamyny ulanmak iň gowusydyr.
-
Haýwan dokumasy göni PCR toplumy (nusga almazdan ...
-
Haýwan dokumasy göni PCR toplum-UNG (Sampl bolmasa ...
-
Haýwan dokumasynyň DNK izolýasiýa toplumynyň DNK çykarylyşy ...
-
Haýwanlaryň jemi RNA izolýasiýa toplumynyň jemi RNK ekstrakty ...
-
Öýjükleriň jemi RNA izolýasiýa toplumynyň jemi RNA izolýasiýasy ...
-
General Plazmid Mini Kit General Plazmid DNA Ex ...
