Tejribeli öndüriji bolduk.Uly arzanladyş Hytaýyň ýokary duýgurlygy üçin bir basgançakly gözleg Rt- bazaryndaky möhüm şahadatnamalarda köplügi gazanmakQpcrKit V2, Hil zawodyň durmuşy, müşderiniň islegine ünsi jemlemek kompaniýanyň ýaşamagynyň we ösüşiniň çeşmesidir, gelşiňize sabyrsyzlyk bilen dogruçyllyk we ak ýürekli iş alyp barýarys!
Tejribeli öndüriji bolduk.Bazary üçin möhüm şahadatnamalarda köplügi gazanmakHytaý Taq DNK polimeraza, Qpcr, Kompaniýamyz wada berýär: amatly bahalar, gysga önümçilik wagty we satuwdan soň kanagatlanarly hyzmat, islän wagtyňyz zawodymyza baryp görmegiňizi hoşal edýäris.Indi bilelikde ýakymly we uzak möhletli iş alyp barmagy arzuw edýäris !!!

Düşündirişler

Bu toplum, RT-qPCR reaksiýalary üçin medeniýetli öýjük nusgalaryndan RNK-ny çalt çykaryp bilýän, şeýle hem köp wagt talap edýän we agyr RNK arassalamak prosesini ýok edip biljek özboluşly liz bufer ulgamyny ulanýar.RNK şablony bary-ýogy 7 minutda alyp bolýar.Kit bilen üpjün edilen 5 × Göni RT Mix we 2 × Göni qPCR Mix-SYBR reagentleri hakyky mukdarda PCR netijelerini çalt we netijeli alyp bilerler.

5 × Göni RT Mix we 2 × Göni qPCR Mix-SYBR berk inhibitor çydamlylygyna eýe we nusgalaryň lizaty gönüden-göni RT-qPCR üçin şablon hökmünde ulanylyp bilner.Bu toplumda özboluşly RNK ýokary ýakynlygy bolan Foregene ters transkriptazasy we Hot D-Taq DNK polimeraza, dNTP, MgCl bar₂, reaksiýa buferi, PCR optimizator we stabilizator.

Aýratynlyklary

200 × 20μl Rxns, 1000 × 20μl Rxns

Kit komponentleri

Aýratynlyklary we artykmaçlyklary

■ pleönekeý we täsirli: “Cell Direct RT” tehnologiýasy bilen RNK nusgalaryny bary-ýogy 7 minutda alyp bolýar.

10 Mysal üçin isleg az, sebäbi 10 öýjük synagdan geçirilip bilner.

■ passokary geçirijilik: 384, 96, 24, 12, 6 guýy tarelkalarda ösdürilip ýetişdirilen öýjüklerde RNK-ny çalt tapyp bilýär.

■ DNK Eraser goýberilen genomlary çalt aýyryp, soňraky synag netijelerine täsirini ep-esli azaldyp biler.

RT Optimallaşdyrylan RT we qPCR ulgamy, iki basgançakly RT-PCR ters transkripsiýasyny has täsirli we PCR has anyk we RT-qPCR reaksiýa ingibitorlaryna has çydamly edýär.

Kit toplumy

Ulanyş gerimi: medeniýetli öýjükler.

- Mysal lizisi bilen çykarylan RNK: diňe bu toplumyň RT-qPCR şablony üçin ulanylýar.

- Kitap aşakdaky maksatlar üçin ulanylyp bilner: gen aňlatmagyň derňewi, siRNA-töwekgelçilikli gen dymdyrmak täsirini barlamak, neşe barlagy we ş.m.

Diagramma

Saklamak we ýaramlylyk möhleti

Bu toplumyň I bölümi 4 at derejesinde saklanmalydyr;II bölüm -20 at derejesinde saklanmalydyr.

Foregene Protease Plus II 4 at derejesinde saklanmalydyr, -20 at doňmaň.

Reagent 2 × Göni qPCR Mix-SYBR garaňkyda -20 at derejesinde saklanmalydyr;ýygy-ýygydan ulanylsa, gysga möhletli saklamak üçin 4 at-da saklanyp bilner (10 günüň içinde ulanyň) .Biz tejribeli öndüriji.Uly arzanladyşly Hytaý ýokary duýgurlygy üçin bir basgançakly gözleg Rt-Qpcr Kit V2 üçin bazaryndaky möhüm şahadatnamalarda köplügi gazanmak, hil zawodyň durmuşy, müşderiniň islegine üns bermek kompaniýanyň ýaşamagynyň we ösüşiniň çeşmesidir, gelşiňize sabyrsyzlyk bilen garaşýarys!
Uly arzanladyşHytaý Taq DNK polimeraza, Qpcr, Biziň kompaniýamyz wada berýär: amatly bahalar, gysga önümçilik wagty we satuwdan soň kanagatlanarly hyzmat, islän wagtyňyz zawodymyza baryp görmegiňizi hoşal edýäris.Indi bilelikde ýakymly we uzak möhletli iş alyp barmagy arzuw edýäris !!!

QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit -Takman

Pişik.DRT-01021/01022

Öýjük göni RT-qPCR üçin, 000 1000,000 öýjük ulanyp

Önümiň tanyşdyrylyşy

Bu önüm, RT-qPCR reaksiýalary üçin medeniýetli öýjük nusgalaryndan RNK-ny çalt çykarmak, köp wagt talap edýän we köp işleýän RNK arassalaýyş amalyny ýok etmek üçin zerur bolan RNA şablonyny almak üçin bary-ýogy 7 minut, toplum bilen üpjün edilen 5 × Direct RT Mix, 2 × Göni qPCR Mix-Taqman real wagt mukdarda PCR netijelerini alyp biler.

5 × Göni RT Mix we 2 × Göni qPCR Mix-Taqman güýçli inhibitor çydamlylygyna eýedir we şablon hökmünde ölçeljek nusganyň lizatyny ulanyp, netijeli tersine we ýörite güýçlendirme ýerine ýetirip biler.Reagentde Foregene ters transkriptaz, Hot D-Taq DNK polimeraza, dNTP, MgCl bar₂, Nusgalary çalt we aňsat kesgitlemek üçin liz buferi bilen ulanyp boljak we ýokary duýgurlyk, aýratynlyk we durnuklylyk aýratynlyklaryna eýe bolan Reaksiýa buferi, PCR Optimizer we Stabilizer.

Önüm aýratynlyklary

NAönekeý, täsirli “Cell Direct RT” tehnologiýasy, RNK nusgalaryny almak üçin 7 minut gerek.

Nusga talaplary az we synag üçin azyndan 10 medeniýetli öýjük ulanylyp bilner.

384, 96, 24, 12 we 6 guýy plitalary ýaly medeniýetli öýjükleri çalt RNK almak üçin ýokary geçiş.

DNK Eraser goýberilen genomlary çalt aýyrmagy başarýar we indiki synag netijelerine täsirini ep-esli azaldýar.

Optimallaşdyrylan RT we qPCR ulgamlary has täsirli ters transkripsiýa, aýratynlyk we has güýçli RT-qPCR reaksiýa inhibitory çydamlylygy bilen iki basgançakly RT-PCR mümkinçilik berýär.

Kit toplumy

Ulanyş gerimi: Medeniýetli öýjükler.

Lizis nusgasy RNK-ny düşündirdi: diňe iki basgançakly RT-qPCR şablony hökmünde ulanylýar.

Kitaplar aşakdaky maksatlar üçin ulanylyp bilner: gen kadalaşdyryjy aňlatma derňewi, allele synagy, neşe barlagy we ş.m.

Kitiň çäklendirmeleri

Güýçlendirilen bölekler ≤ 300 bp.

Kitaplar täze medeni öýjüklere öwrenişýär.

Önümiň hiline gözegçilik

FOREGENE-iň umumy hil dolandyryş ulgamyna görä, her bir toplumyň hiliniň ygtybarlylygyny we durnuklylygyny üpjün etmek üçin “Cell Direct RT-qPCR” toplum toplumlarynyň her partiýasy birnäçe gezek berk synagdan geçirilýär.

Kitiň mazmuny

*:Öýjük lizisi, 5 × Göni RT Mix, 2 × Göni qPCR Mix-Takman aýratyn satyn alyp bolýar, jikme-jiklikler 1-nji goşundyda (13-nji sahypa) berilýär.

Saklamak şertleri

1. ippingük daşamagyň şertleri

Kitabyň <4 ° C ýagdaýynda bolmagyny üpjün etmek üçin pes temperaturaly buz paketini daşamagyň ähli prosesi.

2. Saklamak şertleri

I bölümini 4 ° C, II bölümi -20 ° C derejesinde saklaň.

“Foregene Protease Plus II” -20 ° C-de doňman, 4 ° C derejesinde saklanmalydyr.

Reagent 2 × Göni qPCR Mix-Taqman -20 ° C-de ýa-da ýygy-ýygydan ulanylsa (10 günüň içinde) gysga möhletli ulanmak üçin 4 ° C derejesinde saklanýar.

Kit komponent maglumatlary

Bufer CL: Öýjük liziniň reaksiýalary üçin zerur gurşawy üpjün edýär.

Bufer ST: Soňky RT-e täsir etmezlik üçin lizatdaky işjeň maddany ýatyrýar.

DNK öçüriji: DNK aýyryjy, indiki synaglarda genomy aýyrmagyň täsiri.

5 × Göni RT garyndysy: Iň ýokary deňleşmek üçin ýokary RNK ýakynlygy Foregene Ters Transkriptaz, RNase Inhibitor, dNTP, stabilizatorlar, güýçlendirijiler, optimizatorlar we ters transkripsiýa primerleri bar (Random Primer, Oligo (dT)₁₈Primer).

Foregene Protease Plus II: Liz buferiniň çäginde öýjükler nuklein kislotalary çykarmak üçin lizirlenýär.

2 × Göni qPCR Mix-Taqman: Bu reagentde Hot D-Taq DNK polimeraza, dNTP, MgCl bar₂, reaksiýa buferi, PCR optimizator we stabilizator.

20 × ROX salgylanma boýagy: Adatça ABI, Stratagene we beýleki kompaniýalaryň Real Time PCR güýçlendiriji gurallarynda ulanylýar, PCR doza ýalňyşlyklary sebäpli PCR turbalary bilen turbalarynyň arasyndaky tapawudy sazlamak üçin ulanylýar.Dürli gurallar üçin zerur bolan 20 × ROX salgylanma boýag konsentrasiýasy başga, ulanyjy ony guralyň maslahat berilýän konsentrasiýasyna görä goşup biler.

RNase-ddH₂O: Iki basgançakly RT-qPCR reaksiýalary üçin RNase-den sterilizasiýa edilen ultra arassa suw.

Çäreler:(Kitaby ulanmazdan ozal seresaplyklary üns bilen okaň)

Nusgalaryň arasynda hapalanmazlyk üçin synagyň iş usulyna üns beriň.

RNase hapalanmagyndan we RNK zaýalanmagynyň öňüni almak üçin synag gurşawynyň we gap-gaçlaryň arassalygyna üns beriň.

Täze ýa-da gowy goralýan öýjük nusgalaryny alyň we doňdurylan öýjük nusgalaryny hiç wagt ulanmaň.

5 × Göni qPCR garyndysy, 2 × Göni qPCR Mix-Taqman doňdurmagyň öňüni almaly, ýogsam ters transkripsiýa we PCR netijeliligine täsir eder.

Preparasionöňoperasiýa

Bu toplumy ulanmazdan ozal görkezmeleri üns bilen okaň.Öýjük göni RT-qPCR toplumy ýönekeý, amatly we çalt işleýär we görkezmeler tutuş toplum we ony nädip dogry ulanmalydygy barada doly maglumat berýär.Ulanylmazdan ozal zerur synag materiallaryny we enjamlaryny taýýarlaň.

Synag materiallary we enjamlary

◆ Medeniýet öýjükleri.

◆ 1,5 ml ýa-da 2 ml, RNase- / DNase-den erkin sentrifuga turbasy, RNase- / DNase-erkin uç, 0,2 ml steril qPCR turbasy.

◆ qPCR maşyn, turba, planşet sentrifugasy (≥13,400×g) (eksperimental zerurlyklara baglylykda) we ş.m.

Howpsuzlyk

Product Bu önüm diňe ylmy gözleg maksatly, derman, kliniki, iýmit we kosmetika maksatly ulanmaň.

Chemical Himiki serişdeleri ulananyňyzda degişli laboratoriýa eşiklerini, ellikleri, gorag äýnegini we ş.m. geýiň.

Amalgollanmalar

Öýjük liz ulgamlary, RT ulgamlary we qPCR reaksiýa çözgüdi goşmaça paketleri 1-nji goşundyda (13-nji sahypa) jikme-jiklikler üçin aýratyn satyn alyp bolýar.

Amal gollanmasy

J: RNK goýberilişiniň nusgasy

1. Öýjükler öňünden taýýarlandy: Öýjük medeniýeti plastinkasyny sowuk PBS bilen ýuwuň, soňra öýjükleri lizläň (10-10)⁶), 10⁶ öýjükleriň mukdaryndan has köp, RNK çykarmak we arassalamak üçin Öýjügiň RNA izolýasiýa toplumynyň jemi (DE-03111) ýa-da haýwanlaryň jemi RNA izolýasiýa toplumy (DE-03011) maslahat berilýär.

1.1.Herapyşan öýjükler (mysal üçin 24 guýy tabak)

1.1.1.Her guýydaky öýjükleriň sanyny kesgitläň, öýjükleriň sanynyň 1 × 10dygyny kesgitläň⁵, we medeni tagamdan medeni serişdäni aýyrmak üçin turba ulanyň.

1.1.2.Her guýa 200 μl öňünden sowadylan 1 × PBS goşuň.Gaýtadan turba geçirmäň we PBS-ni guýulardan aýyrmaň.Tabagy egreliň we mümkin boldugyça PBS-i aýyryň.2-nji ädime geçiň.

1.1.3.Öýjük ýuwmak üçin dürli öýjük medeniýeti tagamy ýa-da öýjük medeniýeti tagamynda 1-1 belgili tablisa goşuldy.

Tablisa 1-1: Dürli öýjükler üçin PBS dozasy

Bellik：Berk ýapyşýan öýjükleri üpjün etmek，ýuwulanda köp sanly öýjük ýitgisiniň öňüni aldy.

1.2.Gözenek däl tabaklarda ösdürilip ýetişdirilen asma öýjükler ýa-da ýelmeýän öýjükler

1.2.1.Köp guýy däl plitalarda ösdürilip ýetişdirilen ýapyk öýjükler (asma öýjükleri indiki ädim 1.2.2-den başlaýar), öýjükleri adaty ýygnamak usuly boýunça ýygnaýar we bölýär we medeni plastinka ýa-da merkezden gaçyryş turbasyna ýerleşdirýär;tripsinizasiýa ulanylsa, öýjükleri ýygnamak we galyndy tripsini aýyrmak üçin merkezden gaçyryş işini talap ediň, öýjükleri dargatmak üçin PBS üýtgedilen öýjükleri aýratyn öýjüklere goşdy.

1.2.2.Öýjükleriň sany sanalandan soň, 1 × 10 öýjükli öýjükler⁵ merkezden gaçyryş turbalaryna, merkezden gaçyryş öýjüklerini 1000 × g 10 minutda ýygnaň.

1.2.3.Merkezden gaçyryş turbasyna 200 μl PBS goşuň, yzygiderli turmaň we PBS-ni gönüden-göni isläň.2-nji ädime geç.

2.Sell lizisi: Aşakdaky 1-2 taýýarlanan liz ulgamy boýunça aşakdaky tablisa laýyklykda, otag temperaturasyna, DNK Eraser we Foregene Protease Plus II bilen deňeşdirilen Buffer CL-i aýyryň: (Lizis ergini ulanmaga taýýar).

1-nji tablisa ulgamy taýýarlamak (Bellik: buzda taýýarlykda)

3..

Bellik：Köpürjikleriň emele gelmezligi üçin, turbageçirijiniň şkalasy 200μl ýa-da ondanam pes bolanda düzediň.Öýjükler lizden soň bulutly bolup biler, bu adaty zat.

4. (mysal üçin 24 –well plastinka) suwuklyga 20 μl Bufer ST (dürli liz ulgamlary Buffer ST 1-3-nji tablisada görkezilen mukdarda goşulýar) goşulýar, 5-10 gezek turba geçirilýär, otag temperaturasynda (20-25 ℃) 2 minut inkubasiýa edildi.

Bellik：Turbanyň ujy, lizatyň goşulmagyny üpjün edip, ýeriň aşagyndady，köpürjikleriň döremeginiň öňüni almak üçin, turba turbalarynyň şkalasy 200μl ýa-da ondanam pes bolanda düzediň.

1-3-nji tablisa：Bufer ST goşuň

5.Lizat indiki RT-qPCR synaglary üçin ulanylýar.Soňky synaglary wagtynda ýerine ýetirip bolmaýan bolsa, ony 2 sagatdan köp saklamaly we -20 ℃ ýa -80 at (üç aýdan köp bolmaly däl) saklaň.

B: RT ulgamyny taýýarlamak

1. 5 × göni RT garyndysyny çykaryň we buz wannasyna goýuň, tebigy eremegine ýol beriň we soňra ulanmak üçin ýuwaşlyk bilen garmaly;RNase-Free ddH2O-ny çykaryň we erediň we soňra ulanmak üçin buz wannasyna ýerleşdiriň.Aşakdaky 2-1-nji tablisa laýyklykda buzda reaksiýa ulgamyny taýýarlaň.

2-1-nji tablisa: RT reaksiýa ulgamyny taýýarlamak

2. Ulgam düzülişi tamamlanandan soň, 2 -2 reaksiýa şertlerinde RT reaksiýasy bilen ýuwaşlyk bilen garylan we merkezden gaçyrylan.

2-2-nji tablisa: RT reaksiýanyň ýagdaýy

3. Reaksiýa gutarandan soň, reaksiýa önümi göni qPCR üçin buzuň üstünde goýuldy, uzak möhletli gorap saklamagy -20 ℃ ýa -80 put goýuň.

Bellik: Arassalanmadyk şablonyň ulanylmagy sebäpli ters transkripsiýa önüminde ak çökündiler peýda bolup biler.Bu adaty hadysadyr.Soňky synaglar üçin adatdan daşary tebigaty derrew merkezden gaçyryň.

Alnan RT reaksiýa çözgüdi indiki ädim Real Time PCR reaksiýa ulgamyna goşulýar, reaksiýa ulgamynyň 10-30% aralygynda mukdar goşmak maslahat berilýär.

C: qPCR reaksiýa ulgamyny taýýarlamak

1. Reaksiýa ulgamyny taýýarlamak üçin aşakdaky tablisa 3-1 laýyklykda CDNA şablonynda taýýarlanan B mukdary.

Bellik: cDNA şablonynyň mukdary qPCR ulgamynyň 10-30% -ini tutýar.Mysal üçin, 20μl qPCR ulgamynda 2-6 μl liz bufer goşuň, ýöne 6 μl-dan köp bolmaly däl.

2. qPCR reaksiýasy üçin optimizasiýa gowy qPCR şertleri (Annealing temperatura ， we ş.m.) (3-2-nji tablisada görkezilen reaksiýa şertleri).

Bellik: Has gowy netije almak üçin qPCR reaksiýalary üçin optimal şertleri ulanmaga synanyşyň.

3-1-nji tablisa: PCR reaksiýa ulgamyny taýýarlamak

1 *: Primeriň reaksiýasy pes bolanda, başlangyç konsentrasiýasy 50-900 nM aralygynda sazlanyp bilner.

Bellik: qPCR ulgamy tejribe zerurlyklaryna we floresan welosiped modeline görä sazlanyp bilner.QPCR üçin 50-deμl ulgamy, reagent dozasyny 20-e görä proporsional sazlaňμl ulgamy.

2 *: Floresan mukdar ýylylyk tigirçisine görä ROX salgylanma boýagynyň degişli jemleýji konsentrasiýasyny saýlaň.Umumy floresan mukdar tigir sürýänler üçin iň laýyk ROX salgylanma boýag konsentrasiýalary aşakdaky tablisada görkezilýär:

3-2-nji tablisa: qPCR reaksiýa şertleri berilýär

Bellik: Iň oňat qPCR effektini almak üçin dürli şablonlar we dürli primerler üçin reaksiýa şertlerini optimizirlemek üçin gradient PCR ulanylyp bilner.PCR reaksiýa şertleri floresan analizatoryna, şablonyna, primerine we ş.m. baglylykda üýtgeýär. Belli bir amalda, optimal reaksiýa şertleri floresan mukdar termiki tigirçiniň, şablonyň görnüşine, gyzyklanma bölekleriniň ululygyna, güýçlendirilen bölekleriň esasy yzygiderliligine we GC mazmunyna we desgalaryň uzynlygyna, şol sanda ýylylyk temperaturasyna, reaksiýa wagtyna we ş.m. görä düzülmeli.

Real Time PCR başlangyç dizaýn ýörelgeleri

Öňe ugrukdyryjy we ters primer

Real Time PCR üçin deslapky dizaýn gaty möhümdir.Primerler PCR güýçlendirmegiň aýratynlygy we netijeliligi bilen baglanyşykly we aşakdaky ýörelgelere salgylanyp düzülip bilner:

◆ Esasy uzynlygy: 18-30bp.

◆ GC mazmuny: 40-60%.

◆ Tm bahasy: Primer 5 ýaly başlangyç dizaýn programma üpjünçiligi, primeriň Tm bahasyny berip biler.Stokarky we aşaky akymlaryň Tm bahalary mümkin boldugyça ýakyn bolmaly.Tm hasaplaýyş formulasy hem ulanylyp bilner: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).PCR ýerine ýetirilende, Tm bahasyndan 5 ° C-den pes temperatura, adatça, gyzdyryjy temperatura hökmünde saýlanýar (anneal temperaturanyň degişli ýokarlanmagy PCR reaksiýasynyň aýratynlygyny artdyryp biler).

Ers Primerler we PCR önümleri:

Primer Dizaýn primer PCR güýçlendiriji önümiň uzynlygy, has gowusy 100-150bp.

The Şablonyň ikinji derejeli gurluş meýdanyndaky dizaýn desgalary mümkin boldugyça gaça durmalydyr.

Up upokarky we aşaky akymlaryň 3 ′ ujunyň arasynda 2 ýa-da has köp goşmaça esaslaryň döremeginden gaça duruň.

◆ Primer 3 ′ terminal bazasy yzygiderli 3 goşmaça G ýa-da C bilen bolup bilmez.

◆ Astarlaryň özleri goşmaça gurluşlara eýe bolup bilmezler, ýogsam PCR güýçlendirilmegine täsir edip, saç düzümi emele geler.

◆ ATCG başlangyç yzygiderlilikde mümkin boldugyça deň paýlanmaly we 3 ′ terminal bazasy T. ýaly gaça durmaly.

Goşundy1：Cell göniRT-qPCR Kit komponent goşmaça paket

1. “Lizis” çözgüdi