Recentlyakynda haýran galdyryjy bir zady tapdym!Daş-töweregindäki öňdebaryjy tejribe hünärmenleriniň käbiri käbir esasy tejribe bilim nokatlaryny hem bilenoklar.

Mysal üçin, aşakdaky soraglara jogap berip bilersiňizmi?

OD260 bilen A260 arasynda tapawut barmy?Olaryň hersi näme many berýär?
OD optiki dykyzlygyň gysgaldylyşy (optiki dykyzlyk), A siňdirişiň (siňdirişiň) gysgaldylyşy, iki düşünje aslynda birmeňzeş, “optiki dykyzlyk” “siňdiriş”, ýöne “optiki dykyzlyk” milli standartlaryň köpüsine laýyk gelýär we has standartlaşdyrylýar.

Adatça, nuklein kislotasynyň konsentrasiýasyny hasaplamak üçin OD bahasyny 260nm bilen ölçýäris, şonuň üçin 1OD nämäni aňladýar?
Nuklein kislotasy 260nm tolkun uzynlygynda iň ýokary siňdiriş derejesine eýe, bu DNK we RNK, şeýle hem bölekleýin nuklein kislotasynyň böleklerini öz içine alýar (bu esasy nokat).
260 nm tolkun uzynlygynda ölçenen OD bahasy OD260 hökmünde hasaba alyndy.Nusga arassa bolsa, OD260 bahasy nuklein kislotasynyň nusgasynyň konsentrasiýasyny hasaplap biler.
1 OD260 = 50 μg / ml dsDNA (iki hatar DNK)
= 37 μg / ml ssDNA (bir hatar DNK)
= 40 μg / ml RNK
= 30 μg / ml dNTP (oligonukleotidler)
RT-PCR, Realtime-PCR we QPCR arasynda baglanyşyk we tapawut barmy?
RT-PCR ters transkripsiýa PCR üçin gysga
Real Time PCR = qPCR, mukdar hakyky wagt PCR üçin gysga
Real Time PCR (real wagt floresan mukdar PCR) we Tersine Transkripsiýa PCR (ters transkripsiýa PCR) ikisi hem RT-PCR diýip gysgaldylan ýaly.Internationalöne halkara konwensiýa: RT-PCR tersine ters transkripsiýa PCR degişlidir.

Biologiýada DNK / RNK-nyň uzynlygyny suratlandyrmak üçin köplenç ulanylýan nt, bp we kb haýsylar?
nt = nukleotid
bp = esasy jübüt esasy jübüt
kb = kilobase

Elbetde, köp adam bu ownuk jikme-jikliklere üns bermeýär diýersiňiz!Her kim muny edýär we hiç kim senden nämedigini soramaz.Munuň zerur däldigini bilýärsiňiz, şeýlemi?

, Ok,, ok,, ok, muny bilmek gaty zerur!näme üçin?
Sebäbi makala goýmak isleýärsiňiz!Dogan!Gutardyş maksat edinýärsiňizmi ýa-da ylmy gözleglerde üstünlik gazanýarsyňyzmy, gürlemek üçin makalalara bil baglamalysyňyz!

Nuklein kislotasyny çykarmak iň ýönekeý we iň esasy synag bolmaly.Nuklein kislotasyny çykarmagyň hili indiki synaglaryň netijelerini gönüden-göni kesgitleýär.

Köp gezek aýtsam-da, gyzyklanmaýan dostlar köp.Bu gezek makaladan göçmek kararyna geldim!

MIQE diýlip atlandyrylýan mukdar real wagt PCR synaglaryny neşir etmek üçin iň az maglumat, halkara derejesinde başlanan floresan mukdar tejribe görkezmeleriniň toplumy, floresan mukdar PCR synaglaryna baha bermek we makalalary neşir etmek üçin zerur bolan tejribe maglumatlary üçin iň az standartlary teklip edýär.Synag şerti we tejribeçi tarapyndan berlen derňew usullary arkaly synçylar gözlegçiniň synag meýilnamasynyň dogrulygyna has gowy baha berip bilerler.

Nuklein kislotasyny çykarmak bölüminde aşakdaky anyklaýyş elementleriniň teklip edilendigini görmek bolýar,

“E” berilmeli maglumatlary, “D” bolsa zerur bolsa berilmeli maglumatlary görkezýär.

Forma gaty çylşyrymly, aslynda her kimiň başlamalydygyny aýtmak isleýärin

arassalyk (D), hasyl (D), bitewilik (E) we nuklein kislotalaryna baha bermek üçin yzygiderlilik (E).

Synag endiklerine görä, ilki bilen arassalygy we konsentrasiýany bahalandyrmagyň usullary barada gürleşiň.

OD ölçegi synagçylar üçin iň halanýan we aňsat kesgitleme usulydyr.Principleörelge barada aýdylanda bolsa, bu ýerde jikme-jikliklere girmerin.Köp barlaghanalarda häzirki wagtda nuklein kislotasynyň nusgalaryny mukdar taýdan seljermek üçin ultra-mikro spektrofotometrler ulanylýar.Siňdiriş bahasy görkezilende, programma göni konsentrasiýa bahasyny (nuklein kislotasy, belok we floresan boýag) we şuňa meňzeş gatnaşygy berýär.OD bahasynyň derňewi barada aýdylanda bolsa, bu suraty ýatda saklaň we gowy bolar.

Univershliumumy OD baha çözgüt sanawy

Şeýle-de bolsa, siziň üçin aýratyn çykarylmaly birnäçe gowak bar.

(Galyberse-de, tygşytlaýan we zerur bolýança garaşýan adamlar bolmalydygyňyzy bilýärin!)

Bellik 1 Enjam

OD bahasy dürli enjamlara täsir eder.OD260 belli bir aralykda bolsa, OD230 we OD280 bahalary manylydyr.Mysal üçin, umumy Eppendorf D30-nyň 260nm-de siňdiriş aralygy 0 ~ 3A, Termonyň NanoDrop biri 260nm.Siňdiriş aralygy 0,5 ~ 62.5A.

Bellik 2Eritme reagenti

OD bahasy dürli reagentleriň eremegi bilen täsir edip biler.Mysal üçin, pH-de arassalanan RNK-ny OD260 / 280 okamak7.5 10mM Trisiçinde bufer 1,9-2.1 aralygyndadyrbitarap suw erginigatnaşygy has pes bolar, belki diňe 1.8-2.0 bolar, ýöne bu RNK-nyň hiliniň Tapawudy üýtgedýändigini aňlatmaýar.

Bellik 3Galyndy maddalar

Galyndy maddalaryň bolmagy nuklein kislotasynyň konsentrasiýasynyň ölçeginiň takyklygyna täsir eder, şonuň üçin nuklein kislotasynyň nusgalarynda belok, fenol, polisakarid we polifenol galyndylaryndan mümkin boldugyça gaça durmalydyr.

Şeýle-de bolsa, aslynda organiki reagentler bilen çykarmak köne usul.Söwda toplumlarynda gazyp almak effekti sentrifugasiýa bilen birleşdirilen kremniniň esasly adsorbsion sütüniniň üsti bilen gazanyp bolar, aýyrmak kyn bolan zäherli we zyýanly organiki reagentlerden gaça durar we ş.m. Mesele ýalyForegene-iň nuklein kislotasyny çykarmak toplumy, çalt we howpsuz operasiýa wagtynda DNase / RNase we zäherli organiki reagentleri ulanmaýar, wetäsir edýärgowy(tötänleýin kelleli diýdiler, ýöne bilmek isleýändigiňizi bilýärin).

Mysal 1: Genomiki DNK çykarmak hasyllylygy we arassalygy

Foregene toprak DNK izolýasiýa toplumy (DE-05511) dürli çeşmelerden toprak nusgalaryny bejerýär we alnan genom DNK-nyň mukdary we arassalygy aşakdaky tablisada görkezilýär:
Mysal 2: Dokma RNK-nyň çykarylyşy we arassalygy

Haýwanlaryň jemi RNA izolýasiýa toplumy (RE-03012) dürli dokuma nusgalaryny gaýtadan işledi we alnan RNK mukdary we arassalygy aşakdaky tablisada görkezilýär (syçan dokumasy üçin):
Şeýle-de bolsa, OD bahasy bilen tamamlandy diýip pikir etmäň.Öňde siziň üçin çeken esasy nokatlarym hakda aladaňyz barmy?

Üns beriň

Böleklere bölünen nuklein kislotasynyň molekulalary hem siňdirişde hasaplanar.RNK-da genom DNK galyndylarynyň bardygyny göz öňünde tutsaňyz, OD bahaňyz gaty ýokary ýaly görüner, ýöne RNK-nyň hakyky konsentrasiýasyny kesgitläp bolmaz.RNK-yňyzyň bardygy ýa-da ýokdugy belli däl, şonuň üçin has takyk höküm çykarmak üçin MIQE-de agzalan nuklein kislotasynyň bitewiligini bahalandyrmak üçin henizem giňişleýin baha beriş usuly gerek.