Gurşun

Uzyn kodlanmadyk RNK, lncRNA, 200-den gowrak nukleotidden, köplenç 200-100000 nt aralygynda kodlanmadyk RNK.lncRNA epigenetiki, transkripsiýa we transkripsiýadan soňky derejelerde gen aňlatmasyny kadalaşdyrýar we X hromosomyň dymmagyna, genleriň çap edilmegine we hromatiniň üýtgemegine, transkripsiýa işjeňleşdirilmegine, transkripsiýa päsgelçiligine, ýadro transportyna, öýjük siklini kadalaşdyrmaga, öýjükleriň tapawudyny kadalaşdyrmaga we dozanyň öwezini dolmagyň täsirlerine (dozanyň öwezini dolmagyň täsiri) we beýleki möhüm kadalaşdyryş amallary adamzadyň ýüze çykmagy, ösmegi we öňüni almak bilen baglanyşyklydyr.

01  LncRNA görnüşleri we aýratynlyklary

lncRNA ýokardaky suratda görkezilişi ýaly emele gelişiniň dürli çeşmelerine görä köp görnüşlere bölünýär.Aşakdaky aýratynlyklary bar:

1. lncRNA-lar, adatça, dinamiki aňlatma we tapawutlandyryş wagtynda dürli bölmek usullary bilen has uzyn bolýar
2. Kodlaşdyrma genleri bilen deňeşdirilende, lncRNA adatça has pes aňlatma derejesine eýe
3. LncRNA-laryň köpüsinde dokumanyň diferensiýalaşdyrylmagy we ösüş prosesinde aç-açan wagtlaýyn we giňişlik aňlatma aýratynlygy bar
4. Çişlerde we beýleki kesellerde häsiýetli aňlatmalar bar
5. lncRNA-nyň kiçi ýerleri dürli-dürli
6. Gorap saklamakda yzygiderlilik pes, ýöne funksiýa belli bir derejede gorap saklamak we ş.m.

02 LncRNA ters transkripsiýasy barada ýygy-ýygydan soralýan soraglar

Öýjüklerde lncRNA-nyň az mukdary, uzynlygy we ýokary derejeli gurluşy sebäpli şeýle RNK köplenç sap aýlawlary ýa-da saç gysgyçlary ýaly çylşyrymly gurluşlara eýe bolýar we RT-qPCR şowsuz ters transkripsiýa ýa-da pes netijelilik meselelerine ýykgyn edýär.

03 LncRNA ters transkripsiýa çözgüdi

Merkezi düzgünde, RNK şablon hökmünde DNK sintezlemek üçin özleriniň ters transkriptazlaryny ulanyp, RNK wiruslarynyň işine ters transkripsiýa diýilýär.Witroda cDNA şablonyny sintezlemek üçin RNK wirusynyň ters transkriptazasyny ulanmak prosesine ters transkripsiýa diýilýär.Ters transkripsiýa ulgamyna girýän esasy elementler: RNK şablony, ters transkriptaz, primer we beýleki komponentler.

1.RNA şablony

RNK şablonynyň ters transkripsiýa täsiri onuň gurluşynda, arassalygynda we bitewiliginde öz beýanyny tapýar.Çykarylan RNK-nyň arassalygy we bitewiligi näçe ýokary bolsa, ters transkripsiýanyň netijeliligi we indiki mukdar netijeleri has takyk bolar.Köplenç ulanylýan RNK çykarmak reagentleri bilen arassalanan RNK köplenç alkogolyň we guanidin duzlarynyň galyndylaryny öz içine alýar, olar tersine transkriptaza güýçli täsir edýär.

2. Transkriptazany yzyna alyň

Ters transkriptaz, ters transkripsiýa ulgamynda esasy täsir edýär.Laboratoriýalaryň köpüsinde ulanylýan ters transkriptaz üçin amatly temperatura, adatça 42 ° C.Aslynda, ýokary derejeli RNK gurluşynyň açylmagy has ýokary temperaturany talap edýär we ters transkriptaza bolan talaplar has ýokarydyr.

3.Primer

Tersine transkripsiýa başlangyçlary genlere mahsus primerleri, tötänleýin primerleri we Oligo dT primerlerini öz içine alýar.LncRNA-laryň köpüsinde polyA guýruklary ýok we tötänleýin primerleri Oligo dT bilen dogry sazlamak möhümdir.

4.Başga komponentler

RNK-nyň peselmeginiň aýratyn aňsatdygyny göz öňünde tutup, ters transkripsiýa ulgamyna komponentleriň girizilmegi minimuma eltilip bilner, bu bolsa RNase-nyň girmeginiň öňüni alyp biler we ters transkripsiýanyň göwnejaý ösüşini üpjün edip biler.

ForegeneRNK şablonyndan, qPCR-e ters transkripsiýa alýar

LncRNA kesgitlemäňizi giňişleýin ugratyň

Haýwanlaryň jemi RNA I.izolýasiýaKit (gDNA aýyrmak sütüni bilen)

Öýjükleriň jemi RNA I.izolýasiýaKit (gDNA aýyrmak sütüni bilen)

Lnc-RT HeroTM I (gDNase bilen) (lncRNA-dan birinji hatar cDNA sintezi üçin Super Premiks)

Hakyky wagt PCR EasyTM-SYBR Green I.

Aartykmaçlyklary ofRNK çykarmak:

Kitapda üçünji nesil RNK çykarmak tehnologiýasy ulanylýar, DNase ulanmagyň zerurlygy ýok.

96, 24, 12 we 6 guýy plastinka medeniýetli öýjüklerden 11 minut, gDNA-dan erkin, ýokary arassalygy, ýokary öýjükli RNK-nyň ýokary netijeliligi.

LncRNA ters transkripsiýasynyň artykmaçlyklary:

Genomiki DNK hapalanmagyny çalt aýyrmak üçin LncRNA üçin ýörite döredilen ters transkripsiýa ulgamy.

Ters transkripsiýa ulgamy ýokary ýylylyk durnuklylygyna we 50 ° C-de oňat ters transkripsiýa ýerine ýetirýär.

GCokary GC mazmuny we çylşyrymly ikinji derejeli gurluşly şablonlar ýokary netijelilik bilen tersine bolup biler.

Üstünlikleriof qPCR:

Gyzgyn başlangyç “Foregene Taq Polimeraza” has güýçlendirme netijeliligine, güýçlendirme duýgurlygyna we güýçlendirme aýratynlygyna eýe

Optimallaşdyrylan “Real PCR Easy Mix” SYBR Green-y has ýokary kesgitleme duýgurlygyna öwürýär we floresan intensiwligi dürli görnüşli floresan mukdar synaglarynyň zerurlyklaryny kanagatlandyryp bilýän şuňa meňzeş önümlerden 3-5 esse köpdür.