Göni PCR, nuklein kislotasyny çykarmazdan güýçlendirmek üçin haýwan ýa-da ösümlik dokumalaryny gönüden-göni ulanýan reaksiýa.Köp tarapdan göni PCR adaty PCR ýaly işleýär

Esasy tapawut, göni PCR-de ulanylýan adaty bufer, nusga nuklein kislotasy alynmazdan göni PCR reaksiýasyna sezewar edilip bilner, ýöne fermentleriň çydamlylygy we göni PCR reaksiýasyna gatnaşýan buferiň sazlaşyklylygy üçin degişli talaplar bar.

Umumy nusgalarda PCR inhibitorlary köp ýa-da az bolsa-da, göni PCR fermentleriň we buferleriň täsiri astynda ygtybarly güýçlendirme gazanyp biler.Adaty PCR reaksiýasy şablon hökmünde ýokary hilli nuklein kislotasyny talap edýär, şablonda beloklar we beýleki hapalar bar bolsa PCR reaksiýasynyň oňat ösüşini saklap biler.Göni PCR häzirki wagtda molekulýar diagnostika pudagynda iň meşhur tehnologiýalaryň biridir.

01 Göni PCR ilkibaşda haýwan we ösümlik üçin ulanylýar

Göni PCR-iň ilkinji ulanylyşy genotip ýazmak, transgen, plazmidi ýüze çykarmak, gen nokaut derňewi, DNK çeşmesini kesgitlemek, görnüşleri kesgitlemek, SNP derňewi we beýleki ugurlar ýaly syçanyň gany, dokumasy we saçlary, pişik, towuk, towşan, goýun, mal we ş.m. ösümlik ýapraklary we tohumlary we ş.m.

Bu meýdanlarda käbir umumy aýratynlyklar bar, ýagny maksatly gen düzümi birneme ýokary we nuklein kislotasyny çykarmak kyn, şonuň üçin göni PCR diňe wagt tygşytlamak bilen çäklenmän, netijelere hem az täsir edip biler.

Patogen tapmak üçin ulanylýan göni PCR soňky ýyllarda ýüze çykýar, käbir PCR reagent öndürijileri innowasiýa edende bu ugurda köp tagalla etdiler.Esasanam bu COVID-19 epidemiýasynda SARS-CoV-2 nuklein kislotalaryny ýa-da adam burun kislotalaryny ýa-da adam burun kislotalaryny hil taýdan kesgitlemek üçin Real-RT RT PCR tehnologiýasyny (rRT-PCR) ulanýan Foregene tarapyndan öwrenilen we işlenip düzülen SARS-CoV-2 Nuklein kislotasyny kesgitlemek toplumy (Multiplex PCR Floresan Probe Method) ýaly köp sanly önüm bazara çykdy.

Foregene, adaty ORF1ab, N, E we tapmak üçin Direct PCR tehnologiýasyny ulanýan kompaniýalaryň biridirgörnüşi SARS-CoV-2 B.1.1.7 nesil (Angliýa), B.1.351 nesil (ZA), B.1.617 nesil (IND) we P.1 nesil (BR) ýaly adam nazofargeal ýa-da orofargeal swab nusgalarynda nuklein kislotalary.

02  Göni PCR üçin zerur bolan reagentler

Lizate nusgasy

Lizat nusgasyny özüňiz düzüp ýa-da satyn alyp bilersiňiz.Lizatyň dürli markalarynyň düzümindäki tapawut, lizing ukybyny üýtgeder, soň bolsa lizing wagty birneme üýtgeşik bolar.Mysal üçin, haýwan dokumalarynyň nusgalaryny taýýarlamak üçin 30 minut ýa-da bir gijeki liz maslahat berilýär we wiruslar üçin liz çözgüdi 3-10 minut aralygynda bolýar.

PCR master garyndysy

Aýratyn güýçlendirmek we güýçlendirmek ukybyny ýokarlandyrmak üçin gyzgyn başlangyç DNK polimerazyny ulanmak maslahat berilýär.Göni PCR-iň özeni ýokary çydamly polimerazdyr.

DNK güýçlendirilmegine täsir edýän nusgadaky komponentleri ýok ediň ýa-da saklaň

Nusga lizat bilen gaýtadan işlenenden soň, beloklar, lipidler we beýleki öýjük galyndylary çykar, bu maddalar PCR reaksiýasyny saklar.Şonuň üçin gönüden-göni PCR bu faktorlaryň täsirini azaltmak üçin degişli aýyrmagy ýa-da ingibitorlary goşmagy talap edýär.

03  Göni PCR-iň bäş bilim nokadynyň ýygyndysy

Birinjiden, göni PCR tehnologiýasy dürli biologiki nusgalar üçin göni PCR tehnologiýasydyr.Bu tehniki şertde, nuklein kislotasyny aýyrmak we çykarmak, dokumanyň nusgasyny obýekt hökmünde gönüden-göni ulanmak we PCR reaksiýasyny ýerine ýetirmek üçin maksatly gen primerlerini goşmak zerurlygy ýok.

Ikinjiden, göni PCR tehnologiýasy diňe bir adaty DNK şablony güýçlendirmek tehnologiýasy bolman, eýsem RNK şablony ters transkripsiýa PCR-i hem öz içine alýar.

Üçünjiden, göni PCR tehnologiýasy diňe bir dokumanyň nusgalarynda yzygiderli ýokary hilli PCR reaksiýalaryny gönüden-göni ýerine ýetirmek bilen çäklenmän, reaksiýa ulgamynyň güýçli fona garşy floresan päsgelçilik ukybyna we endogen floresan garşylykly ukybyny öçürmegini talap edýän Real-Time qPCR reaksiýalaryny hem öz içine alýar.

Dördünjiden, göni PCR tehnologiýasyna gönükdirilen nusgalar diňe nuklein kislotasynyň şablonlarynyň çykmagyna mätäç we PCR reaksiýasyna päsgel berýän beloklary, polisakaridleri, duz ionlaryny we ş.m. aýyrmaýar.Reaksiýa ulgamyndaky nuklein kislotasynyň polimerazyny we PCR garyndysyny, çylşyrymly şertlerde fermentleriň işjeňligini we köpeltmegiň takyklygyny üpjün etmek üçin ajaýyp garşylyk we uýgunlaşmagy talap edýär.

Bäşinjisi, hiç hili nuklein kislotasyny baýlaşdyrmazdan bejermezden göni PCR tehnologiýasy tarapyndan nyşana alnan dokuma nusgasy we şablonyň mukdary gaty az, bu reaksiýa ulgamynyň aşa ýokary duýgurlygy we güýçlendiriji netijeliligini talap edýär.