PCR reaksiýalary edende her kimiň hemişe şeýle ýa-da şular ýaly kynçylyklara duş geljekdigine ynanýaryn, ýöne köpüsini iki esasy meselä bölüp bolar:

Gen şablonynyň gaty güýçlendirilmegi (güýçlendirmek);
Maksatly däl gen güýçlendirmek.
Goşundylary ulanmak bu meseleleri çözmek üçin umumy strategiýalardan biridir.Adatça goşundylaryň rolunyň iki tarapy bar:
ikinji derejeli gurluşgenleriň (ikinji derejeli gurluşy);
Aýratyn däl asmany azaltmak.
Bu gün redaktor size PCR reaksiýalarynda we olaryň funksiýalarynda umumy goşundylar bilen gysgaça tanyşdyrar.
Ikinji gurluşy azaldýan goşundylar
sulfoksid(DMSO)
gen nusgalaryýokary GC mazmuny bilen.Şeýle-de bolsa, DMSO Taq polimeraza işjeňligini ep-esli azaldar.Şonuň üçin hemmeler şablonyň elýeterliligini we polimerazyň işjeňligini deňleşdirmeli.Redaktor, tejribäňize laýyk konsentrasiýany tapmak üçin DSMO-nyň 2% -den 10% -e çenli dürli konsentrasiýalaryny synap görmegiňizi maslahat berýär.
Ion däl ýuwujy serişdeler
0,1-1% Triton X-100, 20 ýa-da NP-40 ýaly ion däl ýuwujy serişdeler, adatça DNK-nyň ikinji gurluşyny azaldýar.Bu şablon geniniň güýçlendirilmegini artdyryp bilse-de, ýörite güýçlendirme meselesine sebäp bolar.Şeýlelik bilen, bu goşundylar galyndysyz pes öndürijilikli PCR reaksiýalary üçin gowy işleýär, ýöne HHR reaksiýalary üçin gaty gowy däl.Ion däl ýuwujy serişdeleriň ýene bir peýdasy, SDS hapalanmagynyň azalmagydyr.Adatça DNK çykarmak prosesi wagtynda SDS PCR ädimine getiriler, bu polimerazyň işjeňligini ep-esli päsgel berýär.Şonuň üçin reaksiýa 0,5% Tween-20 ýa-da Tween-40 goşmak SDS-iň ýaramaz täsirlerini zyýansyzlandyryp biler.
Betaine_
Betaine, ikinji derejeli gurluşyň emele gelmegini azaltmak arkaly DNK güýçlendirilmegini gowulandyryp biler we adatça täjirçilik PCR toplumlaryna “syr” bolup durýar.Betaini ulanmak isleseňiz, betaine ýa-da betaine mono-gidrat (Betaine ýa-da Betaine mono-gidrat) goýmaly, ýöne betaine gidroklorid däl (Betaine HCl), iň soňky konsentrasiýasyna 1-1.7M sazlamaly.Betaine, aýratynlygy gowulaşdyrmaga kömek edip biler, sebäbi DNK-nyň eremegine / DNK denaturasiýasynyň esasy jübüt düzümine baglylygyny ýok edýär.
Aýratyn däl asmany azaltmak üçin goşundylar
Formamid
Formamid, köplenç ulanylýan organiki PCR goşundysydyr.DNK-daky esasy çukur we ownuk çukur bilen birleşip, esasy DNK goşa gelixiniň durnuklylygyny peseldip, DNK-nyň ereýän temperaturasyny peseldip biler.PCR synaglarynda ulanylýan formamidiň konsentrasiýasy adatça 1% -5% bolýar.
Tetrametilammiak hloridi( TMAC)
Tetrametilamonium hlorid gibridleşdirmegiň aýratynlygyny (gibridizasiýa aýratynlygy) ýokarlandyryp, DNK-nyň ereýän temperaturasyny ýokarlandyryp biler.Şeýlelik bilen, TMAC aýratyn däl başlangyçlary aýyryp, DNK we RNK-nyň ýalňyşlygyny azaldyp biler.Ulanylsaýaramaz desgalarPCR reaksiýasynda, adatça 15-100mM konsentrasiýasynda ulanylýan TMAC goşmagy ýatdan çykarmaň.
Beýleki umumy goşundylar
Aboveokarda agzalan goşundylaryň iki kategoriýasyna goşmaça, PCR reaksiýalarynda köp ulanylýan goşundylar bar, dürli funksiýalary bar bolsa-da, olar örän möhümdir.
Magniý iony
Magniý iony polimerazyň aýrylmaz kofaktorydyr (kofaktor), ýagny magniý iony bolmazdan, polimeraza hereketsizdir.Şeýle-de bolsa, aşa köp magniý ionlary polimerazyň täsirine täsir edip biler.Her PCR reaksiýasynda magniý ionlarynyň konsentrasiýasy üýtgeýär.Aldaw serişdeleri (EDTA ýa-da sitrat ýaly), dNTP-leriň we beloklaryň konsentrasiýasy magniý ionlarynyň konsentrasiýasyna täsir edýär.Şeýlelik bilen, PCR synagyňyzda kynçylyk çekýän bolsaňyz, dürli magniý ion konsentrasiýalaryny üýtgedip bilersiňiz, mysal üçin, aralygy 0,5–1mM aralyk bilen 1,0-den 4.0mM-a çenli.
Birnäçe doňdurma sikliniň magniý hlorid ergininiň konsentrasiýa derejesine sebäp bolup biljekdigini bellemelidiris.Şonuň üçin ony her gezek ulanmazdan ozal doly eritmeli we ulanmazdan ozal gowy garmaly.
Iýmit serumu albumin(Bovine albumin, BSA)
Molekulýar himiýa synaglarynda, iriňli albumin, esasanam ferment siňdirişini çäklendirmek we PCR synaglarynda gaty köp ýaýran goşundy.PCR reaksiýalarynda BSA fenolik birleşmeler ýaly hapalary azaltmakda kömek edýär.Şeýle hem, reaktiwleriň synag turbasynyň diwaryna ýelmeşmegini azaldyp biljekdigi aýdylýar.PCR reaksiýasynda, adatça goşulan BSA konsentrasiýasy 0,8 mg / ml ýetip biler.
 
Degişli önümler:
PCR Gahrymany(boýag bilen)
PCR Gahrymany