Uthorsazyjylar: Wan Sýaoýan, Zhao Eryu

Bölüm: Jiaozhou hassahanasy, Tongji uniwersitetine degişli Dongfang hassahanasy

Häzirki wagtda dem alyş patogen nuklein kislotasyny ýüze çykarmagyň esasy nusgasy bokurdagyň çişmegi.Köplenç ulanylýan nusga gorap saklamak çözgütleriniň köp görnüşi bar, bularyň hemmesini daşamak we saklamak üçin sowadyjy ýa-da doňdurmaly;Collectionygnamak we daşamak prosesinde pes temperaturanyň ähli prosesine gözegçilik etmek kyn we nusga synagyndan öň hil gözegçiligini üpjün etmek kyn^[1-2].

RNase (RNase), esasan nukleotidleriň arasyndaky fosfodiester baglanyşyklaryny kesýän RNK-ny gidrolizleýän endonukleýdir.RNase molekulasy gaty durnukly, gurluşda disulfid baglanyşyklary bar we işjeňligi bölünen kationlaryň bolmagyny talap etmeýär, şonuň üçin RNase aňsat denatirlenmeýär we ýokary temperaturadan ýa-da denaturantlar ulanylandan soň hem üýtgetmek aňsat.RNases endogen we ekzogen görnüşlere bölünýär.Endogen RNases öýjükler ýarylanda bir wagtda çykyp biler.Şonuň üçin endogen RNazlaryň roluny ýok etmek, RNK çykarmak prosesinde örän möhüm ädimdir.Ekzogen RNases giňden ýaýrandyr.RNK, howada, adam derisinde, saçda we tüýkülikde bar, bu bolsa RNK-nyň aňsat zaýalanmagynyň möhüm sebäpleridir^[3].

Maglumat soragy

CANS-CL02-A009 Tehniki talaplarda “Lukmançylyk barlaghanasynyň hilini we başarnyklary akkreditasiýa görkezmelerini molekulýar diagnoz ulgamynda ulanmak” tehniki talaplarda suwuň hiliniň degişli standartlarynyň düzülmegini teklip edýär;Bir gezek ulanylýan howa geçirijilik gaplary:

RNase / Klassifikasiýa

(1) RNase A.

Içegäniň aşgazan asty mäzinden emele gelen Ribonukleý A (RNase A), endoribonukleýdir, RNK-da pirimidiniň galyndylarynyň 3 ′ ujuna hüjüm edip, goňşy nukleotidler tarapyndan emele gelen sitosini ýa-da urasili kesip biler.Fosfodester baglanyşygy, reaksiýanyň soňky önümi 3 ′ pirimidin nukleotidi we ahyrynda 3 ′ pirimidin nukleotidi bolan oligonukleotiddir.

(2) RNase T1

Ribonukleý T1 (RNase T1) Aspergillus orjzae-den alnan, guanyň 3-terminaly fosfatynda ýörite hereket edýär we bölünýän ýer guan 3 ′ fosfat bilen ýanaşyk nukleotidleriň 5 ′ gidroksiliniň arasynda ýerleşýär.Reaksiýanyň soňky önümi 3′guanil kislotasy we ahyrynda 3′guanil turşusy bilen oligonukleotid bölekleri.

(3) RNase H.

Ribonukleýz H (RNase H) ilkinji gezek göl timus dokumasyndan tapyldy we kodlaýyş geni Escherichia coli-de klonlaşdyryldy.DNK-ny aýratyn peseldip biler: RNK gibrid duplekslerindäki RNK zolaklary, 3′-OH we 5′-monofosfat uçlary bolan oligonukleotidler we mononukleotidler, bir ýa-da iki hatar DNK ýa-da RNK peseldip bilmez.

RNase

Funksiýa we ulanmak

Ribonukleýaz ribonuklein kislotasynyň (RNK) zaýalanmagyny katalizläp biler we emeli usulda sintez edip biler.Derman melhemleri esasan trawmany we bogun agyrylaryny bejermek üçin ulanylýar.Habarlara görä, ribonukleýz öýjükleriň alyş-çalşyny üýtgedip biler, wirus sintezini, witroda gripp wirusynyň köpelmegini we towuk düwünçeklerinde waksina we gerpes wirusynyň döremeginiň öňüni alyp biler.Epidemiki ensefalitiň bejergisi üçin peýdaly bolan ribonukleiziň gündelik öýjükli sanjymyny kliniki taýdan ulanmak, ribonukleiz ribonuklein kislotasynyň (RNK) zaýalanmagyny katalizasiýa edip biler we indi emeli sintez edilip bilner.Derman melhemleri esasan trawmany we bogun agyrylaryny bejermek üçin ulanylýar.Habarlara görä, ribonukleýz öýjükleriň alyş-çalşyny üýtgedip biler, wirus sintezini, witroda gripp wirusynyň köpelmegini we towuk düwünçeklerinde waksina we gerpes wirusynyň döremeginiň öňüni alyp biler.Epidemiki ensefaliti bejermek üçin ribonukleýiň gündelik öýjükli sanjymyny 180 mg sanjym etmek peýdalydyr.

RNase

Inhibitor kesgitlemesi

RNase inhibitor birliginiň kesgitlemesi: 5ng RNase A-nyň işjeňliginiň 50% -ini saklamak üçin zerur ferment mukdary bir birlikdir.

RNase inhibitorlarynyň işleýşi

Guanidin izotiosýanat:

Guanidin izotiosýanat, C2H6N4S molekulýar formulasy bilen organiki birleşme.Esasan biologiki lukmançylykda, himiki reagentlerde we ş.m. Guanidin izotiosýanat belok lizleýji serişdedir we köplenç molekulýar anyklaýyş reagentlerinde liz ergininiň esasy bölegi hökmünde ulanylýar.Dokumany lizläp, öýjük gurluşyny ýok edip we nuklein kislotasyny nukleoproteinden bölüp biler we RNase güýçli denaturasiýa edip biler.Häzirki wagtda iň täsirli RNase inhibitory.

TRIzol, umumy RNK-ni öýjüklerden ýa-da dokumalardan gönüden-göni çykaryp bilýän täze RNK çykarmak reagenti.Onda öýjükleri çalt bozup we öýjükler tarapyndan çykýan nukleazalary saklap bilýän fenol we guanidin izotiosýanat ýaly maddalar bar.

(Şeýle-de bolsa, guanidin izotiosýanat laboratoriýa gözlegçileriniň saglygy üçin howply.)

RNasin:

Düwürtik bagryndan ýa-da adam blastoderminden alnan kislotaly glikoprotein.Rnasin, RNase-ni hereketsizleşdirmek üçin dürli RNases bilen baglanyşyp bilýän RNase-iň bäsdeş däl inhibitorydyr.

(Has giňişleýin maglumat: https: //www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

High temperaturasy:

Temperatureokary temperatura beloklaryň denaturasiýasynyň umumy serişdesidir.

Dietilpirokarbonat (DEPC):

DEPC güýçli, ýöne doly däl RNase inhibitory bolup, beloklary denatirlemek üçin RNase işjeň toparynyň aminokislota imidazol halkasy bilen birleşip, RNase işjeňligini saklap bilýär.

Wanadil ribonukleozid toplumy:

RNase-ni işjeňlige düýbünden päsgel berip bilýän geçiş maddalary görnüşinde RNase bilen baglanyşdyrýan vanadiý oksid ionlary we nukleozidler tarapyndan emele gelen toplum.

beýlekisi:

SDS, karbamid, diatomaz toprak we ş.m. RNase belli bir derejede täsir ediji täsir edýär.

Ekspert synlary

Li ujiuji baş tehnik

Tongji uniwersitetine degişli Dongfang keselhanasynyň, Jiaozhou hassahanasynyň laboratoriýa bölüminiň müdiri

Ekzogen RNase-nyň biodegrasiýa edilmeginiň öňüni almak üçin RNK çykarmak prosesinde maskalar, ellikler we şlýapalar geýilmeli we çalşylmaly.Glasshli aýna gaplary 200 ° C-da 2 sagatdan gowrak guradyjy peçde bişirmeli.Plastmassa ýaly çörek bişirmek üçin ulanylýan materiallary DEPC suwy bilen bejermeli, soňra distillendirilen suw bilen ýuwmaly.RNK çykarmak, saklamak we kesgitlemek üçin ulanylýan reagentler ýa-da enjamlar RNK-a bagyşlanmalydyr we garaşsyz RNK iş meýdany döredilmelidir.

salgylanmalar:

[1] Smit-Vaan HC, Binks MJ, Beissbarth J we ş.m.Nazofarinksdäki bakteriýalar we wiruslar Awstraliýanyň ýerli çagalarynda ýiti aşaky dem alyş ýokançlyklary ýüze çykmazdan ozal [J].“J J Clin” mikrobiol ýokanç keseli, 2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Hytaýyň öňüni alyş lukmançylyk birleşiginiň hassahana ýokanç gözegçiligi bölümi.Kliniki mikrob nusgalaryny ýygnamak we barlamak üçin görkezmeler [J].Hytaý hassahanasyna ýokaşma Journalurnaly, 2018 (20): 3192-3200.

[3] “Kliniki synag on müňlerçe molekulýar biologiýa synagynyň göwrümi”