Ueelimiň dikeldilmegini gowulandyrmak üçin maslahatlar

1. Elektroforez wagtynda nusga ýüküni artdyryň.

2. Täze taýýarlanan elektroforez buferini ulanyň.

3. ueelim kesilende, ýelimiň kesilmeginiň göwrümini azaltmak üçin diňe ýelimleri zolaklar bilen kesmäge synanyşyň: az maksatly bölekler bilen ýelim gerek däl, ýogsam bu dikeliş tizligine täsir eder.

4. Iki ýa-da has köp ýelim eredilenden soň, göwrümi näçe uludygyna garamazdan turbany ulanyň we şol sütüne geçiriň.

5. Solda goşulan ergin birneme köp bolup biler, bu DNK-nyň membrana baglanmagyna has amatly, ýöne adatça 750uldan geçmeýär.

6. Geliň dikeldilmeginiň açary, duz konsentrasiýasy, turşulyk (zarýad) we sütündäki erginiň gidrofobikligi arkaly DNK-ny sütüne baglamakdyr.Şonuň üçin elektroforez buferiniň pH-si gaty ýokary bolsa, solda 10ul (pH 5.0, 3mol / L NaAC) goşup bolýar;Membranadaky DNK molekulalaryny has gowy saklamak üçin, ýelim eredilenden soň suwuklyga 30% izopropanol goşup bolýar.

7. Eluenti goşmazdan ozal, etany doly bugarmak üçin sütüni otag temperaturasynda birnäçe minut (takmynan 10 minut) goýuň.

8. Ahyrynda, dikeldiş göwrümini azaltmak üçin az söz goşuň.Adatça, 30-50μl eluent elýusiýa üçin ulanylýar (gaty az däl, ýogsam membranany çyglap ​​bilmez, elitasiýa üçin amatly däl);elitasiýa damjalary membrananyň merkezinde, membrana bagly DNK-ny doly ýok etmek üçin.

9. Eluenti goşanyňyzdan soň, 55 gradus suw wannasynda 5 minutlap çykarylyp ýa-da 10 minutdan gowrak wagtlap 50 gradus suw wannasyna ýerleşdirilip bilner, ýa-da bir gije 4 dereje parafilm bilen möhürlenip, ertesi gün dikeltmek üçin merkezden gaçyrylyp bilner, täsiri gowy.

10. Merkezden gaçyrylan eluaty adsorbsion sütünine we sentrifuga goşuň.

PCR önümini dikeltmegiň jikme-jik usullary we proseduralary

1. Adaty rezin gaýtadan işlemek

Ueelimi dikeltmek isleseňiz, amatly we dikeldiş tizligi birneme ýokary bolan toplumy ulanmak iň gowusydyr.Eger hakykatdanam el bilen dikeltmeli bolsaňyz, ýelim kesilenden soň TE göwrüminden 3 esse goşup bilersiňiz.Suw wannasynda eredilenden soň fenol, fenol / hloroform arassa çykarylýar we etanol çökýär.Ine.

2. Pes ereýän nokat jellerinden DNK dikelişi

DNK böleklerini arassalamak, jeliň göwrümine deň bolan TE (10 mmol / l Tris-HCl pH8.0, 0,1 mmol / l EDTA) goşuň we jeli doly eritmek üçin 65 ° C suw wannasyna 5 minut goýuň.

Otag otagynyň temperaturasyna getirilenden soň, deň mukdarda fenol (TE bilen doýdy, TE ýokarky gatlakda möhürlendi we fenolyň aşaky gatlagy aýryldy) goşuldy we garyndy ýuwaşlyk bilen garyndy (garyşyk gerek däl) we 12,000 aýlawda 3 minut merkezden gaçyryldy.1-2 gezek gaýtalaň.

Adatdan daşary hadysany alyň, etanol ýagyşyny amala aşyrmak üçin 0,1 göwrüm 3mol / L natriý asetat (pH 5.2) we mutlak etanolyň 2,5 esse mukdaryny goşuň.Arassalanan DNK-ny degişli mukdarda eritiň, mazmuny ölçäň we ulanmaga taýýarlaň (maksatly gen gurluşyny seljermek, gözleg taýýarlamak we ş.m. ulanylyp bilner).

3. Gowy güýçlendirme aýratynlygy bilen PCR dikeldişi

PCR güýçlendirmek aýratynlygy gowy bolsa, bu diňe PCR önüminiň ýönekeý arassalanmagy we dikeldilmegi.PCR önümine 50ug / ml proteinase K goşup, 1 sagatda 37 dereje, fenol / hloroform bilen bir gezek çykaryp, bir gezek hloroform bilen çykaryp we adatdan daşary hadysanyň 0,1 göwrümini goşup bilersiňiz.Natriý asetat 2,5 göwrümli mutlak etanol bilen ýagyş bilen dikeldildi.

Degişli önümler:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/