RNase, köplenç RNK çykarmak synaglaryny geçirýän talyplaryň eşitmek islemeýän duýgur sözi.Doly ýaraglanan, iň ýokary zäherli reagent fenol we hloroform bilen ahyrsoňy çykarylan RNK peseldi.Men ýaraşamok!!!Bu gün, meşhur Rnase-iň gelip çykyşyna göz aýlalyň.

Ribonukleý (RNase) ýa-da RNase, RNK-ny ownuk molekulalara gidrolizläp bilýän ýadro.RNase, kiçijik molekulaly belok hökmünde adatdan daşary durnuklydyr .Adaty ýokary temperatura we ýokary basyşly bug sterilizasiýasy we belok ingibitorlary ony doly hereketsiz edip bilmez.RNase-nyň durnuklylygy esasan gurluşdaky disulfid baglanyşyklaryndan gelýär.Mysal üçin, aşgazan asty mäziniň giňden ulanylýan RNase-de bary-ýogy 124 aminokislotasy bar, ýöne 4 sany disulfid baglanyşygy bar.Kükürt baglanyşygy we disulfid baglanyşygy RNase ajaýyp ýylylyk durnuklylygy berýär.Mundan başga-da, rnase birneme molekulýar agramy bar we köp halatlarda asyl görnüşini çalt dikeldip biler.

Örän durnukly bolmakdan başga-da,RNases laboratoriýada hemme ýerde bar .RNase biologiki gorag mehanizmidir.Bir öýjük üçin ekzogen RNK köplenç ölüme sebäp bolýar.Ekzogen DNK bilen deňeşdirilende, ekzogen RNK köplenç has howpludyr.RNK bagtly terjime edilýär we terjime edilýär, şonuň üçin ähli organizmler diýen ýaly RNK-ny ekzogen RNK-nyň çozuşyndan goramak üçin ösdürdi.Şonuň üçin laboratoriýada ösdürilip ýetişdirilýän bakteriýa öýjükleri we RNK çykarýanlar RNase-nyň ysyny çykarýarlar.Adam bedenindäki suwuklyklar (tüýkülik, gözýaş we ş.m.) köp mukdarda RNase saklaýar, şonuň üçin RNK zaýalananda aglamaň.Näçe köp aglasaňyz, RNK-nyň zaýalanmagy şonça-da erbet bolar!!Daýu dogan, RNK çykarmak üçin amatly däl!

Mundan başga-da, näzik deriňizde RNase köp, derä degen markerler, turbalar, sowadyjy gapylar we gapy tutawaçlarynda RNase hem bar.

Gaty köp gürlemek bilen, geliň, RNases bilen nähili işleşmelidigine göz aýlalyň.

RNK aýrylanda hemmeleriň pikir edýän ilkinji zadyDEPC(dietil pirokarbonat).DEPC esasan RNase işjeň topar histidiniň imidazol halkasy bilen birleşip, belogy denatirleýär we şeýlelik bilen fermentiň işjeňligini saklaýar.0,1% DEPC Rnase has gowy aýyrmak täsirini ýetirip biler, ýöne DEPC-iň belli kanserogenidigine üns bermelidiris, şonuň üçin ulanylanda aýratyn üns berilmelidir.

RNase üçin iki tarapdan başlamaly,birinjisi, endogen RNase-iň işjeňligini saklamakdyr

Trizoldaky guanidin izotiosýanat we DTT ýaly adaty RNK çykarmak reagentleri RNase-nyň disulfid baglanyşygyny açyp biler, emma henizem käbir RNases bar, esasanam dokuma nusgalarynda, pes temperatura üns beriň.

1.Dokumanyň nusgasyny çykandan soň derrew suwuk azotda ýa-da täjirçilik RNK saklamak erginine çümdüriň.

2.Öýjük nusgasynyň RNK-ny alandan soň, liz erginine goşuň we buz gutusyna ýapyň

3. Suwuk azoty üwemek üçin ulanmak iň gowusydyr dokumalaryň nusgalary birmeňzeş bolanda.Suwuk azotsyz elektrik gomogenizatoryny ulananyňyzda, gomogenat adapterini doly sowatmaga üns beriň.

Ikinjisi ekzogen DNase

1.Doly ýaraglanan boluň, laboratoriýa paltosyny geýiň, maska ​​geýiň we bir jübüt täze ellik geýiň (beýle tygşytly bolmaň! Trizol-yň aşa poslaýjydygyny, ellikleriň üsti bilen hem güýçlidigini bellemeli, şonuň üçin eliňize dammaň).

2.Ulanylan turbalaryň ähli maslahatlary, EP turbalary, PCR turbalary we beýleki enjamlar de-RNase bejergisi bolmaly.0,1% DEPC-e siňdirilip, soňra ýokary basyşda basyş edilip bilner.Tüsse kapotundaky işe üns beriň.Localerli zalymlar fermentleri aýyrmak üçin sarp edilýän zatlary gönüden-göni satyn alyp bilerler.

PS: Size ýalta usuly aýdyp bereýin.Temperatureokary temperatura we ýokary basyş RNase-ni doly aýryp bilmese-de, onuň uly bölegini aýyrar.2 gezek ýokary temperatura we ýokary basyş gowy täsir edýär, RNK çykarmak az täsir edýär.

3.Alkogol beloklary görkezip biler,şonuň üçin RNK çykarmak tablisasyny 75% alkogol bilen süpürip bolýar ellikler hem spirt bilen sepilip bilner.

4.Iň soňky RNK erginli ergin we sentrifuga turbasy hem de-RNase bejergisi bolmaly.DEPC suwy, köplenç ulanylýan RNK ergin erginidir.DEPC suwunyň dogry taýýarlanyş usuly barada gürleşeliň (täjirçilik DEPC-ni satyn alanyňyzda täzeden ýüklemegi ýatdan çykarmaň)

Ultrapura suwuna 1: 1000-de DEPC goşuň, gowy silkäň, bir gije 37 ° C-de duruň we ýokary temperaturada we ýokary basyşda 121 ° C-de 15 minut sterilizasiýa ediň.DEPC suwy 1ml alikotlarda -20 ° C derejesinde saklanyp bilner.

Ahyrynda jemlemek üçin: pes temperatura esasy zat, sarp edilýän zatlar gowy işlenýär, doly ýaraglanýar we az gürleýär!

Ine, şu günki strategiýa üçin.Mentionedhli agzalan RNK konsentrasiýasyny we arassalygyny arzuw edýärin.A260 / A280 ikisi hem 2.0!!!

Elbetde, ulanýan bolsaňyzotag temperaturasynyň işleýşi RNK çykarmak toplumy, ýokardaky kynçylyklara duş gelmezligiňiz mümkin.

Otagyň temperaturasynda işlemek, DNase goşmazdan, 11 minutda öýjüklerden jemi RNK çykarýar we 30 minutda haýwan dokumalaryndan ýa-da ösümliklerden jemi RNK çykarýar.

Synag nusgalary üçin habarlaşmagyňyzy haýyş edýäris:overseas@foregene.com

Degişli önümler:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/