PCR reagentleriniň başlangyç döwründe primerleriň we zondlaryň işleýşini barlamak we iň amatly reaksiýa şertlerini kesgitlemek resmi synaglaryň yzygiderli dowam etmegini üpjün etmek üçin zerur şertlerdir.
Şeýlelik bilen, başlangyç tapgyrda başlangyç barlagy nädip tassyklamaly?
Esasy görkezijiler esasy, güýçlendirme egrisi, ct bahasy, güýçlendirme netijeliligi, pes konsentrasiýa nusgasyny kesgitlemek, CV we ş.m.
Esasy
Esasy zat PCR güýçlendirme egrisinde keseligine çyzyk.PCR güýçlendirme reaksiýasynyň ilkinji birnäçe siklinde floresan signaly kän üýtgemeýär we göni çyzyk emele getirýär.Bu göni çyzyk.
PCR başlangyç zondlary barlanylanda, esasy derejäniň bardygyna üns beriň.Astar zondyň konsentrasiýasynyň arassalygy esasy bazanyň ýokarlanmagyna ýa-da ýykylmagyna sebäp bolar.Esasy esas hem gaty içgin görkeziji.
Güýçlendirmek egrisi
Anotherene bir duýgur görkeziji güýçlendiriji egriniň görnüşidir.Ikinji derejeli güýçlendirmekden ýa-da beýleki adaty güýçlendirme egrilerinden gaça durmak üçin S şekilli egriniň bolmagy iň gowusydyr.
Ct bahasy
Esasy nokatdan ekspensial ösüşe çenli inflýasiýa nokadyna gabat gelýän siklleriň sany Ct bahasydyr.
Birmeňzeş nusga üçin dürli primer zondlary dürli güýçlendirme egrilerine sebäp bolýar we güýçlendiriş netijeliligine we päsgelçilik derejesine degişli Ct bahasy täsir eder.Teoriýa boýunça, saýlaýan başlangyç zondyň Ct bahasy näçe kiçi bolsa, şonça-da gowy.
Güýçlendirmek netijeliligi
PCR güýçlendirmek netijeliligini bahalandyrmagyň iň ygtybarly we durnukly usullaryndan biri, gözlegçiler tarapyndan giňden tanalýan adaty egridir.Bu usul, şablonlaryň otnositel sanyna gözegçilik etmek üçin birnäçe nusgalary taýýarlamagy öz içine alýar.Bu nusgalar, adatça konsentrirlenen aksiýa erginleriniň yzygiderli erginleri bilen ýasalýar, iň köp ulanylýan 10 esse eritme.Cq bahasyny almak üçin güýçlendirmek üçin standart qPCR programmasyny ulanyp, iň soňunda her nusganyň konsentrasiýasyna we Cq = -klgX0 + b çyzykly deňlemäni almak üçin E = 10 (-1 / k) -1 standart egrini çyzyň.San taýdan derňew üçin qPCR ulanylanda güýçlendiriş netijeliligi 90% -110% (3.6> k> 3.1) aralygynda bolmaly.
Pes konsentrasiýaly nusgalary ýüze çykarmak
Nusga konsentrasiýasy pes bolanda, dürli primer zondlarynyň ýüze çykarylyş derejesi başga bolýar.Köpeltmek üçin 20 sany pes konsentrasiýaly nusgany saýlaýarys we iň ýokary kesgitleme derejesi bolan primer-synag ulgamy iň gowusydyr.
Üýtgeýiş koeffisiýenti (CV)
Nuklein kislotasyny güýçlendirmek üçin reagentiň çyzyk standartyna laýyklykda dürli primer zondlary bilen 10 sany iki nusga tapylyp bilner.
Mukdar reagentleri:
Takyklyk
Bir toparyň içindäki takyklyk gabat gelmelidir: synag konsentrasiýasynyň logarifmiki bahasynyň üýtgeme koeffisiýenti (CV,%) ≤5%.Nusga konsentrasiýasy pes bolanda, ýüze çykaryş konsentrasiýasynyň logarifminiň üýtgeme koeffisiýenti (CV,%) ≤10% bolýar
Hil reagentleri:
Takyklyk
Bir toparyň içindäki takyklyk:
(1) Ct bahasynyň üýtgemeginiň koeffisiýenti (CV,%) ≤5%
Şol nusga 10 gezek paralel synagdan geçirilýär we synag netijeleri yzygiderli bolmaly
Iş wagty: 18-2021-nji sentýabr
