• facebook
  • Baglanyşyk
  • youtube

Keseliň başlangyç döwründe, çalt ösmegi sebäpli, şübheli näsaglara çalt diagnoz goýmak COVID-19-yň öňüni almak üçin açardyr.Käbir tassyklanan nuklein kislotasyny kesgitleýji reagentleriň gysga ösüş wagty bar we gyssagly öndürijiligi tassyklamak, reagent optimizasiýasynyň ýeterlik däldigi we partiýalaryň arasynda uly tapawutlar ýaly meseleler bar;Nuklein kislotasyny ýüze çykarmak prosesiniň dürli ugurlaryndaky dürli kliniki barlaghanalaryň problemalary, nuklein kislotasyny tapmagyň netijeleriniň takyklygyna hem täsir edip biler.Bu makalada häzirki SARS-CoV-2 nuklein kislotasyny ýüze çykarmakdaky esasy baglanyşyklar we nokatlar jemlener we laboratoriýa nuklein kislotasyny ýüze çykarmak we kliniki laýyk gelmezlik baradaky ýalňyş negatiw we polo positiveitel gaýtadan gözden geçirmek meseleleri seljeriler.

SARS-CoV-2 nuklein kislotasyny tapmagyň ýörelgeleri

SARS-CoV-2, takmynan 29 kb, 10 belok bilen netijeli kodlap bilýän gen geni bolan RNK wirusydyr.Wiruslar RNK we belokdan, iň ýokarky gatlak lipidlerden we glikoproteinlerden ybarat daşky örtükdir.Içinde belok kapsidi RNK-ny gurşap alýar we şeýlelik bilen aňsat zaýalanýan RNK-ny (P1) goraýar.

zfgd

P1 SARS-COV-2 gurluşy

Wiruslar ýokançlyga sebäp bolmak üçin belli bir öýjük üstündäki reseptorlar arkaly öýjüklere girýärler we köpeltmek üçin öýjükleri ulanýarlar.

Wirus nuklein kislotasyny ýüze çykarmak ýörelgesi, wirus RNK-ny öýjük lizatynyň üsti bilen açmak we ýüze çykarmak üçin real wagt floresan ters transkripsiýa-polimeraza zynjyr reaksiýasyny (RT-PCR) ulanmakdyr.

Ectionüze çykarmak ýörelgesiniň açary, nuklein kislotasynyň yzygiderliliginiň “maksatly gabat gelmegini” gazanmak üçin primerleri we zondlary ulanmak, ýagny 30,000 töweregi bazadaky beýleki wiruslardan tapawutly SARS-CoV-2 nuklein kislotasynyň yzygiderliligini tapmak (nuklein kislotasynyň beýleki wiruslara meňzeşligi) “Pes” meýdançasy.

Astarlar we zondlar SARS-CoV-2 nuklein kislotasynyň belli bir sebiti bilen ýokary derejede gabat gelýär, ýagny aýratynlygy gaty güýçlidir.Synag ediljek nusganyň hakyky wagtda floresan RT-PCR güýçlendirme netijesi oňyn bolansoň, nusgada SARS-CoV-2-iň bardygyny subut edýär.Serediň.

zfgd2

P2 SARS-CoV-2 nuklein kislotasyny kesgitlemegiň ädimleri (real wagt floresan RT-PCR)

SARS-CoV-2 nuklein kislotasyny kesgitlemek üçin laboratoriýanyň şertleri we talaplary

Nuklein kislotasyny barlamak barlaghanalary otrisatel basyş gurşawy üçin iň amatlydyr we basyş gözegçiligine üns bermeli, howanyň akmagyny dowam etdirmeli we aerozollary ýok etmeli.Nuklein kislotasyny barlaýan işgärler degişli kärleri bolmaly, polimeraza zynjyryň reaksiýa tälimini almaly we baha bermeli.Laboratoriýa berk dolandyrylmaly, ýerinde zonalaşdyrylmaly we degişli däl işgärleriň girmegi düýbünden gadagan edilýär.Arassa ýer şemalladylmaly we dezinfeksiýa edilmeli.Degişli zatlar zolaklara ýerleşdirilýär, arassa we hapa bölünýär, wagtynda çalşylýar we ýerinde hapalanýar.Adaty dezinfeksiýa: Hlorly dezinfeksiýa has uly ýerler üçin esasy çözgütdir we ownuk ýerlerde 75% alkogol ulanylyp bilner.Aerozollar bilen iş salyşmagyň gowy usuly howa çalşygy üçin penjireleri açmakdyr we howany dezinfeksiýa ultramelewşe şöhleleri, süzgüç we howa dezinfeksiýa arkaly hem amala aşyrylyp bilner.

SARS-CoV-2 nuklein kislotasyny kesgitlemegiň esasy baglanyşyklary we parametrleri (real wagt floresan RT-PCR)

Laboratoriýalarda adatça nuklein kislotasynyň “ýüze çykarylmagyna” uly üns berilse-de, aslynda nuklein kislotasynyň “çykarylmagy” wirus nusgalaryny ýygnamak we saklamak bilen ýakyndan baglanyşykly üstünlikli ýüze çykarmak üçin esasy ädimlerden biridir.

Häzirki wagtda nasofargeal çişler ýaly iň giňden ulanylýan dem alyş nusgalary, nuklein kislotasyny çykarmak we liz ergini esasynda taýýarlanan inaktiwasiýa (gorap saklamak) çözgüdi bolan ikinji usuly ulanýar.Bir tarapdan, bu wirusy gorap saklamak çözgüdi wirusyň belogyny kesgitläp biler, işjeňligini ýitirip, ýokanç bolmaz, daşamak we kesgitlemek tapgyrynyň howpsuzlygyny ýokarlandyryp biler;beýleki tarapdan, nuklein kislotasyny çykarmak, nuklein kislotasynyň dargamak fermentini ýok etmek we wirusyň öňüni almak üçin wirusy gönüden-göni döwüp biler.RNK zaýalanýar.

Nuklein kislotasyny çykarmak liz ergininiň esasynda taýýarlanan wirus nusgasy.Esasy komponentler deňagramly duzlar, etilenediaminetetraasetik kislotany garyjy serişde, guanidin duzy (guanidin izotiosýanat, guanidin gidroklorid we ş.m.), anion surfaktant (dodekan) natriý sulfat), kationiki surfaktant (tetradekil trimetil ammiakol, okisolit, gidrolit) birnäçe ýa-da has köp komponent.Häzirki wagtda nuklein kislotasyny çykarmak toplumlarynyň köp görnüşi bar we dürli nuklein kislotasyny çykarmak we arassalamak reagentleri ulanylýar.Şol bir nuklein kislotasyny çykarmak we arassalamak reagenti ulanylsa-da, her toplumyň çykarmak proseduralary başga.

Häzirki wagtda Milli lukmançylyk önümleri administrasiýasy tarapyndan tassyklanan nuklein kislotasyny anyklaýyş toplumy önümleri SARS-CoV-2 genindäki ORF1ab, E we N genleri esasynda saýlanýar.Dürli önümleri ýüze çykarmak ýörelgeleri esasan birmeňzeş, ýöne desgalary we gözleg dizaýnlary başga.Bir maksatly segmentler (ORF1ab), goşa maksatly segmentler (ORF1ab, N ýa-da E) we üç maksatly segmentler (ORF1ab, N we E) bar.Ectionüze çykarmak we düşündirmek, nuklein kislotasyny çykarmak we real wagt floresan RT-PCR reaksiýa ulgamynyň arasyndaky tapawut, degişli toplum görkezmelerine salgylanmalydyr we ulanyjylara terjime etmek üçin toplum görkezmelerinde görkezilen düşündiriş usulyny berk berjaý etmegi maslahat berilýär.Hakyky floresan RT-PCR bilen güýçlendirilen umumy sebitler, primerler we gözleg yzygiderliligi P3-de görkezilýär.

zfgd3

P3 SARS-CoV-2 amplikon nyşanynyň genomdaky ýerleşişi we primerleriň we zondlaryň yzygiderliligi

SARS-CoV-2 nuklein kislotasyny kesgitlemegiň netijelerini düşündirmek (Real-Time floresan RT-PCR)

“SARS-CoV-2 ýokaşmagy üçin öýken keseliniň öňüni almak we gözegçilik meýilnamasy” (Ikinji neşir) ”ilkinji gezek bir gen güýçlendirmek netijelerine baha bermegiň ölçeglerini düşündirdi:

1. Hiç bir Ct ýa-da Ct≥40 negatiw däl;

2. Ct <37 oňyn;

3. 37-40 Ct bahasy çal reňkli meýdandyr.Synagy gaýtalamak maslahat berilýär.Ct <40-ny gaýtadan işlemegiň netijesi we güýçlendirme egrisiniň iň ýokary derejesi bar bolsa, nusga polo positiveitel hasaplanýar, ýogsam negatiwdir. "

Gollanmanyň üçünji neşiri we gollanmanyň dördünji neşiri ýokardaky ölçegleri dowam etdirdi.Şeýle-de bolsa, täjirçilik toplumlarynda ulanylýan dürli nyşanlar sebäpli, gollanmanyň ýokarda agzalan 3-nji neşiri öndürijiniň beren görkezmeleriniň agdyklyk edýändigini belläp, nyşanlaryň utgaşmasyny kesgitlemek üçin kriteriýalary bermedi.Gollanmalaryň bäşinji neşirinden başlap, iki nyşana aýdyňlaşdyryldy, esasanam höküm çykarmak kyn bolan bir maksat üçin kazyýet ölçegleri..Agny, laboratoriýa SARS-CoV-2 nuklein kislotasyny ýüze çykarmak üçin bir işiň oňyndygyny tassyklamak islese, aşakdaky 2 şertden 1-i ýerine ýetirilmeli:

(1) Şol bir nusgadaky SARS-CoV-2 (ORF1ab, N) iki nyşan, real wagt floresan RT-PCR tarapyndan oňyn synagdan geçirilýär.Bir maksat oňyn bolsa, gaýtadan nusga almak we gaýtadan synag etmek zerurdyr.Synag netijeleri bolsa, ýeke-täk maksat oňyn bolsa, oňyn hasaplanýar.

.Şeýle-de bolsa, görkezmelerde nuklein kislotasyny barlamagyň negatiw netijeleriniň SARS-CoV-2 ýokaşmasyny aradan aýyryp bilmejekdigi nygtalýar.Falsealan negatiwlere sebäp bolup biljek faktorlary, mysal üçin hiliň pesligi (orofarinksden we beýleki böleklerden dem alyş nusgalary), nusga ýygnamak gaty ir ýa-da giç, nusgalar saklanmady, daşalmady we dogry işlenmedi we tehnologiýanyň özünde kynçylyklar bardy (wirusyň üýtgemegi, PCR inhibisiýasy) we ş.m.

SARS-CoV-2 ýüze çykarylanda ýalan negatiwleriň sebäpleri

Häzirki wagtda aladalanýan nuklein kislotasyny barlamakda “ýalan negatiw” düşünjesi, köplenç nuklein kislotasynyň synag netijeleriniň kliniki ýüze çykmalara laýyk gelmeýän “ýalan negatiwleri” aňladýar, ýagny kliniki alamatlar we şekillendiriş netijeleri COVID-19-dan gaty şübheli, ýöne nuklein kislotasynyň synaglary hemişe “negatiw” bolýar.Milli saglyk komissiýasynyň kliniki barlaghana merkezi “ýalan negatiw” SARS-CoV-2 synagyny düşündirdi.

(1) ýokaşan adamyň öýjüklerinde belli bir mukdarda wirus bar.Bar bolan maglumatlar, bedene wirus ýokaşandan soň, wirusyň bokurdaga burnundan we agzyndan, soň bolsa trahaha we bronhlara girip, soň bolsa alveolalara ýetýändigini görkezýär.Infectedokanç adam inkubasiýa döwrüni, ýumşak alamatlary, soň bolsa agyr alamatlar we keseliň dürli döwürlerini başdan geçirer.Bedeniň dürli ýerlerinde bar bolan wirusyň mukdary başga.

Öýjük görnüşleriniň wirus ýükleri nukdaýnazaryndan alveolýar epitel öýjükleri (aşaky dem alyş ýollary)> howa ýollarynyň epitel öýjükleri (ýokarky dem alyş ýollary)> fibroblastlar, endotel öýjükleri we makrofaglar we ş.m .;nusga görnüşinden alveolýar lavaage suwuklygy (iň ajaýyp)> çuňňur üsgülewük tüýküligi> nazofargeal swab> orofargeal swab> gan.Mundan başga-da, wirus nejislerde hem ýüze çykyp bilýär.Şeýle-de bolsa, operasiýanyň amatlylygyny we näsaglaryň kabul edilmegini göz öňünde tutup, köplenç ulanylýan kliniki nusga tertibi orofargeal swab> nazofargeal swab> bronhial lava suwuklygy (çylşyrymly operasiýa) we çuň tüýkülik (adatça gury üsgülewük, almak kyn).

Şonuň üçin käbir näsaglaryň orofarinksiniň ýa-da nazofarinksiň öýjüklerindäki wirusyň mukdary az ýa-da aşa az.Synag üçin diňe orofarinksiň ýa-da nazofarinksiň nusgalary alynsa, wirusly nuklein kislotasy tapylmaz.

(2) Nusga ýygnamak wagtynda wirus saklaýan öýjükler ýygnalmady ýa-da wirusly nuklein kislotasy netijeli saklanmady.

[Collection Nädogry ýygnamak meýdançasy, mysal üçin, orofargeal çişleri ýygnanda, ýygnamagyň çuňlugy ýeterlik däl, ýygnanan nazofargeal çişler burun boşlugynyň çuňlugyna ýygnanmaýar we ş.m. collectedygnanan öýjükleriň köpüsi wirusy ýok öýjükler bolup biler;

PlSamping swablary nädogry ulanylýar.Mysal üçin, PE kellesi materialy üçin PE süýümi, poliester süýümi we polipropilen süýümi ýaly sintetiki süýümler maslahat berilýär.Pagta ýaly tebigy süýümler hakyky işde ulanylýar (belogyň güýçli siňdirilmegi we ýuwulmagy aňsat däl) we neýlon süýümleri (suwuň pes siňdirilmegi, nusga almagyň göwrüminiň ýeterlik bolmazlygyna sebäp bolýar);

Nuc Nuklein kislotalaryny (DNK / RNA) siňdirmek aňsat bolan polipropilen ýa-da polietilen plastmassa turbalaryny nädogry ulanmak ýaly wirus saklaýjy turbalary nädogry ulanmak, ammar ergininde nuklein kislotasynyň konsentrasiýasynyň peselmegine sebäp bolýar.Iş ýüzünde wirus nuklein kislotalaryny saklamak üçin polietilen-propilen polimer plastmassany we käbir ýörite bejerilen polipropilen plastik gaplary ulanmak maslahat berilýär.]

[Collection Nädogry ýygnamak meýdançasy, mysal üçin, orofargeal çişleri ýygnanda, ýygnamagyň çuňlugy ýeterlik däl, ýygnanan nazofargeal çişler burun boşlugynyň çuňlugyna ýygnanmaýar we ş.m. collectedygnanan öýjükleriň köpüsi wirusy ýok öýjükler bolup biler;

PlSamping swablary nädogry ulanylýar.Mysal üçin, PE kellesi materialy üçin PE süýümi, poliester süýümi we polipropilen süýümi ýaly sintetiki süýümler maslahat berilýär.Pagta ýaly tebigy süýümler hakyky işde ulanylýar (belogyň güýçli siňdirilmegi we ýuwulmagy aňsat däl) we neýlon süýümleri (suwuň pes siňdirilmegi, nusga almagyň göwrüminiň ýeterlik bolmazlygyna sebäp bolýar);

Nuc Nuklein kislotalaryny (DNK / RNA) siňdirmek aňsat bolan polipropilen ýa-da polietilen plastmassa turbalaryny nädogry ulanmak ýaly wirus saklaýjy turbalary nädogry ulanmak, ammar ergininde nuklein kislotasynyň konsentrasiýasynyň peselmegine sebäp bolýar.Iş ýüzünde wirus nuklein kislotalaryny saklamak üçin polietilen-propilen polimer plastmassany we käbir ýörite bejerilen polipropilen plastik gaplary ulanmak maslahat berilýär.]

(4) Kliniki laboratoriýa işi standartlaşdyrylanok.Synag we saklanyş şertleri, kliniki barlaghanalaryň standart işlemegi, netijeleri düşündirmek we hil gözegçiligi synag netijeleriniň takyklygyny we ygtybarlylygyny üpjün etmek üçin esasy faktorlardyr.Milli saglyk komissiýasynyň kliniki barlaghana merkezi tarapyndan 2020-nji ýylyň 16-24-nji martynda dogry netijeleri alan 844 barlaghananyň 701-si (83.1%) hünär derejesi, 143-si (16,9%) ýokdy.Kwalifikasiýa, umumy laboratoriýa synag şertleri gowy, ýöne dürli barlaghanalarda işgärleriň işleýiş ukyby, bir maksatly polo positiveitel nusga düşündiriş ukyby we hil gözegçiligi boýunça tapawutlar bar.

SARS-CoV-2 nuklein kislotasyny tapmagyň ýalňyş negatiwini nädip azaltmaly?

Nuklein kislotasyny ýüze çykarmakda ýalan negatiwleri azaltmak, ýalan negatiwleri öndürmegiň dört tarapyndan optimallaşdyrylmalydyr.

(1) ýokaşan adamyň öýjüklerinde belli bir mukdarda wirus bar.Wirus ýokaşan adamlara güman edilýän adamyň bedeniniň dürli ýerlerinde konsentrasiýasy dürli wagtlarda üýtgeşik bolar.Düwürtik ýok bolsa, bronhial lava suwuklygynda ýa-da zyňyndylarda bolup biler.Synag üçin bir wagtyň özünde ýa-da keseliň ösüşiniň dürli tapgyrlarynda birnäçe görnüşli nusga ýygnalyp bilinse, ýalan negatiwlerden gaça durar.

(2) Wirus saklaýan öýjükler nusga ýygnamak wagtynda ýygnalmalydyr.Bu mesele, nusga ýygnaýjylaryň taýýarlygyny güýçlendirmek arkaly köp derejede çözülip bilner.

(3) Ygtybarly IVD reagentleri.Milli derejede reagentleriň ýüze çykarylyşyna baha bermek boýunça gözleg geçirmek we bar bolan meseleleri ara alyp maslahatlaşmak arkaly reagentleri ýüze çykarmagyň netijeliligi hasam gowulaşyp, derňewiň duýgurlygy ýokarlandyrylyp bilner.

(4) Kliniki barlaghanalaryň standartlaşdyrylan işi.Laboratoriýa işgärleriniň taýýarlygyny güýçlendirmek, laboratoriýanyň hilini dolandyrmak ulgamyny yzygiderli gowulandyrmak, bölünişikleri üpjün etmek we işgärleriň ýüze çykarmak ukybyny ýokarlandyrmak bilen, laboratoriýa amallarynyň nädogry bolmagy sebäpli ýalan negatiwleri azaltmak mümkindir.

Dikeldilen we boşadylan hassalarda SARS-CoV-2 nuklein kislotasynyň synagynyň polo positiveitel gaýtadan synag edilmeginiň sebäpleri

“COVID-19 diagnoz we bejeriş meýilnamasy (Synag ýedinji neşir)” COVID-19 hassalarynyň bejerilmegi we keselhanadan çykarylmagy üçin kriteriýalaryň biri, yzygiderli iki dem alyş ýollarynyň nusgalarynyň negatiw nuklein kislotasynyň synagynyň bolmagy (azyndan 24 sagat aralykda), ýöne SARS-CoV-2 nuklein kislotasynyň synagynyň oňyn bolandygy sebäpli gaty az.

(1) SARS-CoV-2 täze wirus.Onuň patogen mehanizmine, ýüze çykan keseliň doly keşbine we keseliň ugrunyň aýratynlyklaryna has giňişleýin düşünmek zerurdyr.Şonuň üçin bir tarapdan boşadylan hassalaryň dolandyrylyşyny güýçlendirmek we 14 günlük lukmançylyk gözegçiligini geçirmek zerurdyr.Keseliň ýüze çykmagyna, ösüşine we netijelerine düşünmegi çuňlaşdyrmak üçin yzarlamak, saglyga gözegçilik we saglyk görkezmelerini ýerine ýetiriň.

(2) Näsaga ýene wirusa ýokaşyp biler.Akademik Zhong Nanshan: Bejerilen hassalaryň antikorlary barlygy sebäpli, SARS-CoV-2 gaýtadan hüjüm edenlerinde antikorlar bilen ýok edilip bilner.Dikeldilen hassanyň sebäbi ýa-da wirusyň mutasiýa ýa-da laboratoriýa synaglarynyň sebäbi bolup biljek köp sebäpler bar.Wirusyň özi bolsa, SARS-CoV-2 mutasiýa, dikeldilen hassanyň öndürýän antikorynyň üýtgän wirusa garşy netijesiz bolmagyna sebäp bolup biler.Näsaga üýtgedilen wirus ýokaşan bolsa, nuklein kislotasynyň synagy ýene-de oňyn bolup biler.

(3) Laboratoriýa synag usullary barada aýdylanda, her synag usulynyň çäkleri bar.SARS-CoV-2 nuklein kislotasynyň tapylmagy gen yzygiderliliginiň, reagentleriň düzüminiň, usulyň duýgurlygynyň we beýleki sebäpleriň bolmagy sebäpli bar bolan toplumlaryň pes kesgitleme çäklerine eýe.Näsag bejerilenden soň bedendäki wirus azalýar.Synagdaky wirusly ýük, kesgitlemegiň aşaky çäginden aşakda bolsa, “otrisatel” netije peýda bolar.Şeýle-de bolsa, bu netije bedendäki wirusyň düýbünden ýok bolandygyny aňlatmaýar.Wirus bejergi bes edilenden soň bolup biler.Direliş ”atly göçürmäni dowam etdiriň.Şol sebäpli, boşadylandan soň 2-den 4 hepdäniň dowamynda hepdede bir gezek gözden geçirmek maslahat berilýär.

(4) Nuklein kislotasy wirusyň genetiki materialydyr.Wirus hassanyň wirusa garşy bejergisinden soň öldürilýär, ýöne wirusly RNK bölekleri henizem adam bedeninde saklanýar we bedenden doly çykmaýar.Käwagt, käbir ýagdaýlarda has saklanyp bilner.Uzak wagt we bu wagt nuklein kislotasynyň synagy “wagtlaýyn” oňyn bolar.Näsagyň dikeldiş wagtynyň uzalmagy bilen, bedendäki RNK bölekleri kem-kemden tükenenden soň, nuklein kislotasynyň synag netijesi negatiw bolup biler.

(5) SARS-CoV-2-iň nuklein kislotasynyň synag netijesi diňe wirusly RNK-nyň bardygyny ýa-da ýokdugyny subut edýär, wirusyň işjeňligini we wirusyň ýokaşýandygyny subut edip bilmeýär.Oňyn nuklein kislotasy barlagyndan geçen hassanyň ýene ýokanç çeşmesine öwrüljekdigini ýa-da ýokdugyny subut etmek zerurdyr.Wirus medeniýetini kliniki nusgalarda alyp barmaly we ýokançdygyny subut etmek üçin “janly” wirusy ösdürmeli.

Gysgaça mazmun

Gysgaça aýtsak, SARS-CoV-2 nuklein kislotasy ýalan negatiwleri, retest pozitiwleri we kliniki ýüze çykmalara laýyk gelmeýän beýleki şertleri barlap bolmaz.Hakyky barlagda we synagda kliniki alamatlary, şekillendiriş synaglaryny (KT) we synaglary birleşdirmek maslahat berilýär, ýitirilen diagnozyň we nädogry diagnozyň öňüni almak üçin hemmetaraplaýyn diagnoz üçin laboratoriýa synagy (nuklein kislotasy testi + wirusa garşy antikor synagy) netijeleri.Synag netijeleriniň kliniki ýüze çykmalara aç-açan laýyk gelmeýändigi ýüze çykarylsa, SARS-CoV-2 wirusynyň irki ýokaşmagy, gaýtalanýan ýokançlygy ýa-da beýleki dem alyş wiruslary ýokaşmagy we ş.m. mümkin bolmazlygy üçin ähli synag baglanyşygyny (nusga ýygnamak, dolanyşyk we gaýtadan işlemek baglanyşyklary) giňişleýin seljermek maslahat berilýär.Şertler rugsat berse, gaýtadan gözden geçirmek üçin tüýkürik ýa-da alveolýar lava suwuklygy ýaly has duýgur nusgalary ýygnamak maslahat berilýär.

Degişli önümler :

SARS-CoV-2 Nuklein kislotasyny kesgitlemek toplumy (Multiplex PCR floresan gözleg usuly)


Iş wagty: 03-2021-nji sentýabr